| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 肝细胞癌简介 | 第11页 |
| 1.2 HNF4α的结构及功能研究 | 第11-13页 |
| 1.3 HNF4α在肝癌中的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 穿膜肽简介、功能及应用 | 第14-16页 |
| 1.5 研究目的与内容 | 第16-18页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第16页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-38页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第18-21页 |
| 2.1.1 常用仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.2 常用试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 免疫反应所用抗体 | 第19-20页 |
| 2.1.4 常用载体与菌株 | 第20页 |
| 2.1.5 引物序列 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-38页 |
| 2.2.1 融合蛋白表达载体pET28a-P-HNF4α构建 | 第21-26页 |
| 2.2.1.1 P-HNF4α基因克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.1.2 克隆片段回收与纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 克隆片段和质粒双酶切 | 第24-25页 |
| 2.2.1.4 连接 | 第25页 |
| 2.2.1.5 转化 | 第25页 |
| 2.2.1.6 阳性克隆鉴定及测序 | 第25-26页 |
| 2.2.2 融合蛋白表达菌株BL21-P-HNF4α建立 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 质粒抽提 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 表达质粒转化BL21菌株 | 第27页 |
| 2.2.3 重组蛋白P-HNF4α的表达与纯化 | 第27-29页 |
| 2.2.3.1 P-HNF4α的表达优化 | 第27-28页 |
| 2.2.3.2 P-HNF4α的纯化优化 | 第28页 |
| 2.2.3.3 P-HNF4α的大量纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.3.4 P-HNF4α蛋白的透析与浓缩 | 第29页 |
| 2.2.4 重组蛋白P-HNF4α的鉴定 | 第29-32页 |
| 2.2.4.1 P-HNF4α浓度测定 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 P-HNF4α的纯度鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹 | 第32页 |
| 2.2.6 细胞培养 | 第32-33页 |
| 2.2.7 P-HNF4α转导肝癌细胞 | 第33页 |
| 2.2.8 P-HNF4α穿膜效率检测 | 第33页 |
| 2.2.9 核浆分离 | 第33页 |
| 2.2.10 细胞免疫荧光 | 第33-34页 |
| 2.2.11 报告基因检测P-HNF4α的转录激活活性 | 第34-35页 |
| 2.2.12 RNA抽提,及逆转录成cDNA | 第35-36页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR | 第36页 |
| 2.2.14 细胞生长曲线检测 | 第36页 |
| 2.2.15 细胞划痕实验 | 第36页 |
| 2.2.16 小室迁移实验 | 第36-37页 |
| 2.2.17 小室侵袭实验 | 第37页 |
| 2.2.18 统计分析 | 第37-38页 |
| 第3章 重组蛋白P-HNF4α的表达、纯化与鉴定 | 第38-46页 |
| 3.1 融合蛋白原核表达系统建立 | 第38-41页 |
| 3.2 重组蛋白P-HNF4α的表达条件优化 | 第41-43页 |
| 3.2.1 菌体浓度优化 | 第41页 |
| 3.2.2 诱导温度优化 | 第41-42页 |
| 3.2.3 P-HNF4α诱导剂浓度优化 | 第42-43页 |
| 3.3 P-HNF4α的纯化条件优化 | 第43页 |
| 3.4 P-HNF4α的大量纯化 | 第43-44页 |
| 3.5 P-HNF4α的浓度测定 | 第44页 |
| 3.6 P-HNF4α的纯度鉴定 | 第44-45页 |
| 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 重组蛋白P-HNF4α对肝癌细胞的影响 | 第46-54页 |
| 4.1 P-HNF4α转导肝癌细胞 | 第46-47页 |
| 4.2 P-HNF4α穿膜效率检测 | 第47页 |
| 4.3 P-HNF4α转导肝癌细胞后的亚细胞定位 | 第47-49页 |
| 4.4 报告基因检测P-HNF4α的转录激活活性 | 第49-50页 |
| 4.5 P-HNF4α对HNF4α肝功能靶基因的表达调控 | 第50页 |
| 4.6 P-HNF4α对肝癌细胞干性相关基因的表达调控 | 第50-51页 |
| 4.7 P-HNF4α对肝癌细胞增殖的影响 | 第51页 |
| 4.8 细胞划痕与迁移实验 | 第51-52页 |
| 4.9 小室侵袭实验 | 第52-53页 |
| 本章小结 | 第53-54页 |
| 第5章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 5.1 结论 | 第54页 |
| 5.2 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 硕士期间发表论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
