| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-26页 |
| 1.1 合成生物学简介 | 第10-14页 |
| 1.2 振荡器分类 | 第14-17页 |
| 1.2.1 按基因线路中所使用的基因个数分类 | 第14-16页 |
| 1.2.2 按所牵涉到的途径分类 | 第16-17页 |
| 1.3 振荡器举例 | 第17-21页 |
| 1.3.1 压缩振荡器 | 第17-18页 |
| 1.3.2 同步振荡器 | 第18-19页 |
| 1.3.3 基因-代谢振荡器 | 第19-21页 |
| 1.4 元件介绍 | 第21-24页 |
| 1.4.1 乳糖操纵子 | 第21页 |
| 1.4.2 促降解标签 | 第21-22页 |
| 1.4.3 群体感应系统 | 第22页 |
| 1.4.4 终止子 | 第22-23页 |
| 1.4.5 荧光蛋白 | 第23-24页 |
| 1.5 敲除方法 | 第24-25页 |
| 1.6 研究目的 | 第25-26页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第26-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-31页 |
| 2.1.1 菌株,质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第26-28页 |
| 2.1.4 培养基及试剂配置 | 第28-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-40页 |
| 2.2.1 培养方法 | 第31页 |
| 2.2.2 保菌 | 第31-32页 |
| 2.2.3 电泳 | 第32页 |
| 2.2.4 PCR | 第32-33页 |
| 2.2.5 质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.2.6 DNA纯化 | 第34页 |
| 2.2.7 胶回收 | 第34-35页 |
| 2.2.8 RNA提取 | 第35页 |
| 2.2.9 质粒构建 | 第35-36页 |
| 2.2.10 转化 | 第36页 |
| 2.2.11 敲除 | 第36-37页 |
| 2.2.12 诱导表达 | 第37页 |
| 2.2.13 荧光检测 | 第37-38页 |
| 2.2.14 HPLC检测 | 第38-39页 |
| 2.2.15 活细胞观察 | 第39-40页 |
| 第3章 基因线路设计 | 第40-48页 |
| 3.1 使用PR启动子的基因线路 | 第40-43页 |
| 3.1.1 双质粒系统 | 第40-42页 |
| 3.1.2 单质粒系统 | 第42-43页 |
| 3.2 使用由LacI与cI共同控制的“与门”启动子的基因线路 | 第43-45页 |
| 3.2.1 双质粒系统 | 第43-44页 |
| 3.2.2 单质粒系统 | 第44-45页 |
| 3.3 使用P_(Lac)启动子的基因线路 | 第45-48页 |
| 3.3.1 双质粒系统 | 第45-46页 |
| 3.3.2 单质粒系统 | 第46-48页 |
| 第4章 元件验证及基因线路构建 | 第48-65页 |
| 4.1 P_R启动子 | 第48页 |
| 4.2 双阻遏启动子 | 第48-49页 |
| 4.3 乳糖启动子 | 第49-51页 |
| 4.4 组成型启动子 | 第51-52页 |
| 4.5 P_(Lux)启动子 | 第52-53页 |
| 4.6 LuxI | 第53-58页 |
| 4.6.1 HPLC验证 | 第53-57页 |
| 4.6.2 荧光检测验证 | 第57-58页 |
| 4.6.3 蛋白电泳 | 第58页 |
| 4.7 终止子 | 第58-61页 |
| 4.7.1 逆转录PCR验证 | 第59页 |
| 4.7.2 荧光检测验证 | 第59-61页 |
| 4.8 报道基因 | 第61页 |
| 4.9 P_(Lac)缺失质粒的构建 | 第61-62页 |
| 4.10 敲除 | 第62-65页 |
| 4.10.1 敲入LuxR基因 | 第62-63页 |
| 4.10.2 LacI敲除 | 第63-65页 |
| 第5章 基因线路检测 | 第65-71页 |
| 5.1 使用葡萄糖作为碳源 | 第65-68页 |
| 5.1.1 不添加AHL | 第65-66页 |
| 5.1.2 Os-ASV结果 | 第66-67页 |
| 5.1.3 Os-LAA结果 | 第67-68页 |
| 5.2 使用甘油作为碳源 | 第68-71页 |
| 5.2.1 添加30nM AHL | 第68-69页 |
| 5.2.2 添加100nM AHL | 第69-71页 |
| 第6章 结论与展望 | 第71-72页 |
| 6.1 结论 | 第71页 |
| 6.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77页 |