| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-43页 |
| 第一章 蛋白质组学研究进展 | 第17-34页 |
| 1 蛋白质组学与基因组学 | 第17-18页 |
| 2 差异蛋白质组学 | 第18-24页 |
| 2．1 双向凝胶电泳 | 第18-20页 |
| 2．1．1 样品制备 | 第18-19页 |
| 2．1．2 蛋白等电聚焦电泳 | 第19-20页 |
| 2．1．3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第20页 |
| 2．1．4 蛋白质斑点的检测 | 第20页 |
| 2．2 荧光双向凝胶内差异电泳 | 第20-22页 |
| 2．3 稳定同位素代谢标记技术 | 第22页 |
| 2．4 同位素亲和标签技术 | 第22-23页 |
| 2．5 SELDI蛋白质芯片技术 | 第23-24页 |
| 3 功能蛋白质组学 | 第24-34页 |
| 3．1 质谱技术 | 第24-26页 |
| 3．1．1 MALDI-MS | 第24-25页 |
| 3．1．2 ESI-MS | 第25页 |
| 3．1．3 ESI-三级四极质谱仪 | 第25-26页 |
| 3．1．4 ESI-离子阱质谱仪 | 第26页 |
| 3．2 蛋白质鉴定策略 | 第26-29页 |
| 3．2．1 经典的蛋白质鉴定方法 | 第26-27页 |
| 3．2．2 以质谱为基础的蛋白质鉴定 | 第27-29页 |
| 3．3 蛋白质组生物信息学 | 第29-34页 |
| 3．3．1 蛋白质组数据库 | 第29-32页 |
| 3．3．2 蛋白质组信息化分析工具 | 第32-34页 |
| 第二章 昆虫蛋白质组学 | 第34-40页 |
| 1 一般昆虫蛋白质组学研究 | 第34-35页 |
| 2 家蚕蛋白质组学 | 第35-40页 |
| 2．1 家蚕蛋白质组研究样品制备 | 第36-37页 |
| 2．2 家蚕胚胎蛋白质组研究 | 第37-38页 |
| 2．3 家蚕丝腺蛋白质组研究 | 第38页 |
| 2．4 家蚕体壁、脂肪体蛋白质组研究 | 第38-39页 |
| 2．5 家蚕中肠、血液等其它组织蛋白质组研究 | 第39-40页 |
| 第三章 家蚕雌性附腺的研究进展 | 第40-43页 |
| 1 形态学研究 | 第40页 |
| 2 Ng(No-glue)突变体 | 第40-41页 |
| 3 发育过程中蛋白质和核酸的变化 | 第41页 |
| 4 分泌的粘液蛋白的研究 | 第41-43页 |
| 第二部分 研究内容 | 第43-116页 |
| 第一章 家蚕部分组织双向凝胶电泳方法的优化 | 第43-63页 |
| 1 材料和仪器 | 第43-47页 |
| 1．1 试剂 | 第43-44页 |
| 1．2 主要试剂的配制 | 第44-46页 |
| 1．3 主要仪器 | 第46-47页 |
| 1．3．1 电泳仪器及相关仪器 | 第46页 |
| 1．3．2 其它仪器设备 | 第46-47页 |
| 2 蛋白质定量 | 第47页 |
| 3 家蚕雌性附腺分泌部组织双向凝胶电泳 | 第47-54页 |
| 3．1 实验材料 | 第47页 |
| 3．2 蛋白质的提取 | 第47-49页 |
| 3．3 蛋白质的双向电泳 | 第49-50页 |
| 3．3．1 第一向固相pH梯度等电聚焦 | 第49页 |
| 3．3．2 第二向垂直SDS-PAGE | 第49-50页 |
| 3．4 蛋白质银染 | 第50页 |
| 3．5 凝胶扫描 | 第50页 |
| 3．6 图像分析 | 第50-52页 |
| 3．6．1 蛋白点检测(Spots detection) | 第50-51页 |
| 3．6．2 背景消减(Background subtraction) | 第51页 |
| 3．6．3 标准化处理(Normalization) | 第51-52页 |
| 3．6．4 匹配(Spot matching) | 第52页 |
| 3．6．5 1 D和2 D校正(1 D and 2 D Calibration) | 第52页 |
| 3．7 实验结果 | 第52-54页 |
| 3．7．1 蛋白质的提取率 | 第52-53页 |
| 3．7．2 性附腺分泌部组织蛋白质双向凝胶电泳图谱 | 第53页 |
| 3．7．3 双向电泳的分辨率 | 第53-54页 |
| 3．8 讨论 | 第54页 |
| 4 家蚕丝腺组织的双向凝胶电泳 | 第54-57页 |
| 4．1 材料 | 第54页 |
| 4．2 蛋白质样品的制备 | 第54-55页 |
| 4．3 第一向固相pH梯度等电聚焦 | 第55页 |
| 4．4 第二向垂直SDS-PAGE | 第55页 |
| 4．5 银染 | 第55页 |
| 4．6 凝胶扫描与图象分析 | 第55页 |
| 4．7 黄茧雌蚕和白茧雄蚕中部丝腺组织的蛋白质图谱 | 第55-57页 |
| 5 家蚕中肠双向凝胶电泳 | 第57-58页 |
| 5．1 材料 | 第57页 |
| 5．2 蛋白质样品的制备 | 第57页 |
| 5．3 第一向固相pH梯度等电聚焦 | 第57页 |
| 5．4 第二向垂直SDS-PAGE | 第57页 |
| 5．5 银染 | 第57页 |
| 5．6 凝胶扫描与图象分析 | 第57页 |
| 5．7 黄茧雌蚕和白茧雄蚕中肠组织的蛋白质图谱 | 第57-58页 |
| 6 家蚕血液双向凝胶电泳 | 第58-59页 |
| 6．1 材料 | 第58页 |
| 6．2 样品制备 | 第58页 |
| 6．3 第一向固相pH梯度等电聚焦 | 第58-59页 |
| 6．4 第二向垂直SDS-PAGE | 第59页 |
| 6．5 银染 | 第59页 |
| 6．6 凝胶扫描与图象分析 | 第59页 |
| 6．7 家蚕血液蛋白的2-DE图谱 | 第59页 |
| 7 讨论 | 第59-63页 |
| 7．1 蛋白质提取率 | 第59-60页 |
| 7．2 蛋白质样品制备 | 第60页 |
| 7．3 双向电泳技术 | 第60-61页 |
| 7．4 凝胶显色和保存 | 第61页 |
| 7．5 分辨率 | 第61-62页 |
| 7．6 实验的重复性 | 第62-63页 |
| 第二章 不同发育阶段家蚕雌性附腺的蛋白质组研究 | 第63-85页 |
| 1 家蚕正常雌性附腺及其Ng突变体发育过程中的形态学研究 | 第63-66页 |
| 2 家蚕雌性附腺发育后期蛋白质双向凝胶电泳谱的建立 | 第66-70页 |
| 2．1 家蚕正常雌性附腺发育后期蛋白质双向凝胶电泳谱的建立 | 第66-68页 |
| 2．1．1 实验材料与方法 | 第66页 |
| 2．1．2 不同发育时期正常雌性附腺的蛋白质表达图谱分析 | 第66页 |
| 2．1．3 结果与分析 | 第66-68页 |
| 2．2 家蚕Ng突变体雌性附腺发育后期蛋白质双向凝胶电泳图谱的建立 | 第68页 |
| 2．2．1 实验材料与方法 | 第68页 |
| 2．2．2 不同发育时期Ng突变体雌性附腺的蛋白质表达图谱分析 | 第68页 |
| 2．2．3 结果与分析 | 第68页 |
| 2．3 讨论 | 第68-70页 |
| 3 家蚕雌性附腺发育后期的差异蛋白质及MALDI-TOF质谱鉴定 | 第70-85页 |
| 3．1 差异蛋白质分析 | 第70-72页 |
| 3．2 MALDI-TOF质谱鉴定 | 第72-74页 |
| 3．2．1 材料和方法 | 第72-73页 |
| 3．2．2 MALDI-TOF-MS测定 | 第73-74页 |
| 3．3 质谱数据的数据库检索 | 第74页 |
| 3．4 结果 | 第74-81页 |
| 3．5 讨论 | 第81-85页 |
| 3．5．1 质谱鉴定蛋白的功能分析 | 第81-83页 |
| 3．5．2 银染蛋白点的胶内酶解和质谱结果的检索分析 | 第83-85页 |
| 第三章 家蚕雌性附腺分泌部组织的DIGE分析 | 第85-102页 |
| 1 材料与方法 | 第85-87页 |
| 1．1 试剂与仪器 | 第85-86页 |
| 1．2 材料 | 第86页 |
| 1．3 样品制备和定量 | 第86页 |
| 1．4 Cy荧光标记 | 第86页 |
| 1．5 2-D凝胶电泳 | 第86-87页 |
| 1．6 DIGE分析 | 第87页 |
| 2 差异表达蛋白的质谱分析 | 第87-88页 |
| 2．1 胶内酶解 | 第87-88页 |
| 2．2 质谱分析 | 第88页 |
| 3 质谱图的数据库检索 | 第88页 |
| 4 结果 | 第88-100页 |
| 4．1 DIGE 2-D电泳图谱 | 第88-89页 |
| 4．2 差异蛋白质分析 | 第89-94页 |
| 4．3 差异蛋白点的质谱及生物信息学分析 | 第94-99页 |
| 4．4 质谱检索结果 | 第99-100页 |
| 5 结果和讨论 | 第100-102页 |
| 第四章 家蚕雌性附腺分泌物功能蛋白质组学研究 | 第102-116页 |
| 1 家蚕雌性附腺分泌蛋白质双向凝胶电泳分析 | 第103页 |
| 1．1 材料 | 第103页 |
| 1．2 蛋白质样品的制备 | 第103页 |
| 1．3 蛋白质的双向电泳 | 第103页 |
| 1．3．1 第一向固相pH梯度等电聚焦 | 第103页 |
| 1．3．2 第二向垂直SDS-PAGE | 第103页 |
| 1．4 蛋白质银染色 | 第103页 |
| 1．5 凝胶扫描与图像分析 | 第103页 |
| 2 蛋白质的质谱鉴定 | 第103-104页 |
| 2．1 蛋白质的胶内酶解 | 第103页 |
| 2．2 MALDI-TOF质谱分析 | 第103-104页 |
| 2．3 质谱结果的数据库检索 | 第104页 |
| 3 结果与分析 | 第104-114页 |
| 3．1 胶蛋白的二维电泳分离 | 第104-105页 |
| 3．2 质谱分析结果 | 第105-111页 |
| 3．3 质谱检索结果 | 第111-114页 |
| 4 讨论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-130页 |
| 结论 | 第130-132页 |
| 附录Ⅰ | 第132-134页 |
| 附录Ⅱ | 第134-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
