| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-36页 |
| 1.1 狂犬病的流行病学 | 第21-22页 |
| 1.1.1 狂犬病的全球概况 | 第21页 |
| 1.1.2 狂犬病病毒的宿主范围 | 第21-22页 |
| 1.1.3 狂犬病的临床症状 | 第22页 |
| 1.2 狂犬病病毒分子结构 | 第22页 |
| 1.3 狂犬病的发病机制 | 第22-25页 |
| 1.3.1 糖蛋白和致病性 | 第23-24页 |
| 1.3.2 细胞死亡和致病性 | 第24页 |
| 1.3.3 狂犬病病毒逃避先天免疫反应 | 第24-25页 |
| 1.4 狂犬病病毒感染的免疫应答 | 第25-26页 |
| 1.5 狂犬病病毒感染与Toll样受体通路的免疫反应 | 第26-30页 |
| 1.5.1 Toll样受体及其与狂犬病病毒的相互作用 | 第27-28页 |
| 1.5.2 狂犬病病毒感染的免疫应答涉及TLR7 | 第28-29页 |
| 1.5.3 狂犬病病毒感染MyD88敲除的小鼠 | 第29-30页 |
| 1.6 Viperin | 第30-34页 |
| 1.6.1 Viperin的结构与特征 | 第31页 |
| 1.6.2 Viperin表达调控 | 第31-32页 |
| 1.6.3 Viperin的抗病毒功能 | 第32-33页 |
| 1.6.4 Viperin在免疫信号与免疫反应中的作用 | 第33页 |
| 1.6.5 病毒逃避与利用viperin | 第33-34页 |
| 1.7 挑战与展望 | 第34-36页 |
| 第二章 Viperin抑制狂犬病病毒的复制是通过破坏细胞膜胆固醇和鞘磷脂 | 第36-75页 |
| 2.1 材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 细胞和病毒 | 第37页 |
| 2.1.2 质粒 | 第37页 |
| 2.1.3 抗体 | 第37页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第37-38页 |
| 2.1.5 主要的试剂 | 第38页 |
| 2.1.6 引物设计与合成 | 第38-39页 |
| 2.2 方法 | 第39-47页 |
| 2.2.1 重组狂犬病病毒的拯救 | 第39-40页 |
| 2.2.2 病毒效价的滴定 | 第40页 |
| 2.2.3 不同细胞对狂犬病病毒的易感性实验 | 第40页 |
| 2.2.4 Western blot | 第40-42页 |
| 2.2.5 大肠杆菌培养基的配制 | 第42页 |
| 2.2.6 制备感受态细胞大肠杆菌DH5α所用试剂的配制 | 第42页 |
| 2.2.7 细胞培养所用溶液 | 第42页 |
| 2.2.8 细胞或小鼠脑组织总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.9 QRT-PCR | 第43-44页 |
| 2.2.10 real-time PCR反应条件的优化 | 第44页 |
| 2.2.11 标准曲线的制作 | 第44-45页 |
| 2.2.12 实时定量PCR实验 | 第45页 |
| 2.2.13 BHK-GFP或BHK-viperin-GFP细胞系构建 | 第45页 |
| 2.2.14 MβCD与myriocin对细胞毒性的检测 | 第45页 |
| 2.2.15 免疫共沉淀 | 第45-46页 |
| 2.2.16 MβCD对细胞胆固醇、myriocin对细胞鞘磷脂降解情况 | 第46页 |
| 2.2.17 过表达viperin对细胞胆固醇和鞘磷脂的影响试验 | 第46-47页 |
| 2.3 结果 | 第47-70页 |
| 2.3.1 rRC-HL狂犬病病毒株的拯救 | 第47页 |
| 2.3.2 狂犬病病毒效价的测定 | 第47-48页 |
| 2.3.3 不同细胞对狂犬病病毒的易感性实验 | 第48页 |
| 2.3.4 狂犬病病毒感染不同细胞后viperin基因的差异表达 | 第48-51页 |
| 2.3.5 瞬时过表达viperin抑制狂犬病病毒的复制 | 第51-54页 |
| 2.3.6 稳定表达viperin抑制狂犬病病毒的复制 | 第54-60页 |
| 2.3.7 Viperin抑制狂犬病病毒复制能力与其蛋白表达量成正比 | 第60页 |
| 2.3.8 Viperin抑制狂犬病病毒的功能区定位 | 第60-62页 |
| 2.3.9 免疫共沉淀试验证实viperin不结合狂犬病病毒的N、P和M蛋白 | 第62-63页 |
| 2.3.10 过表达viperin抑制狂犬病病毒的出芽 | 第63-64页 |
| 2.3.11 Viperin对细胞膜鞘磷脂和胆固醇的影响 | 第64-65页 |
| 2.3.12 MβCD/Myroicin对狂犬病病毒吸附和穿入的影响 | 第65-66页 |
| 2.3.13 MβCD/Myroicin对狂犬病病毒出芽的影响 | 第66-70页 |
| 2.4 讨论 | 第70-74页 |
| 2.5 小结 | 第74-75页 |
| 第三章 Viperin抑制狂犬病病毒复制受上游TLR3/4通路调控 | 第75-98页 |
| 3.1 材料 | 第76-77页 |
| 3.1.1 细胞/动物和病毒 | 第76页 |
| 3.1.2 主要的试剂 | 第76页 |
| 3.1.3 抗体 | 第76页 |
| 3.1.4 主要仪器见2.1.4 | 第76-77页 |
| 3.2 方法 | 第77-79页 |
| 3.2.1 细胞总RNA的提取见2.2.8 | 第77页 |
| 3.2.2 Real-time RT-PCR方法的建立见2.2.12 | 第77页 |
| 3.2.3 Western blot见2.2.4 | 第77页 |
| 3.2.4 免疫应答基因转录谱分析 | 第77-78页 |
| 3.2.5 流式细胞术分析RAW264.7细胞TLR4的表达情况 | 第78页 |
| 3.2.6 NF-kB、IRF3和TLR4的抑制试验 | 第78页 |
| 3.2.7 TLR3基因敲除的RAW264.7细胞系的建立 | 第78-79页 |
| 3.3 结果 | 第79-94页 |
| 3.3.1 狂犬病病毒感染RAW264.7细胞免疫应答基因转录普分析 | 第79-85页 |
| 3.3.2 TLR4对viperin的影响 | 第85-88页 |
| 3.3.3 TLR3对viperin的影响 | 第88-89页 |
| 3.3.4 狂犬病病毒感染对TLR3/4信号传导通路相关因子的影响 | 第89-91页 |
| 3.3.5 NF-kB信号通路对狂犬病病毒上调viperin的影响 | 第91-92页 |
| 3.3.6 狂犬病病毒上调viperin通过IRF3/Hsp90信号通路 | 第92-94页 |
| 3.3.7 狂犬病病毒与viperin相互作用示意图 | 第94页 |
| 3.4 讨论 | 第94-97页 |
| 3.5 小结 | 第97-98页 |
| 第四章 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-113页 |
| 附章一：广西狂犬病病毒GXHXN株的全基因测序及生物学特性初步研究 | 第113-137页 |
| 摘要 | 第113-114页 |
| ABSTRACT | 第114-116页 |
| 1 材料与方法 | 第116-121页 |
| 1.1 细胞与动物 | 第116页 |
| 1.2 单克隆抗体 | 第116-117页 |
| 1.3 样品 | 第117页 |
| 1.4 引物设计与合成 | 第117-118页 |
| 1.5 病毒RNA的提取 | 第118页 |
| 1.6 聚合酶链式反应(PCR) | 第118页 |
| 1.7 测序 | 第118页 |
| 1.8 基因序列分析 | 第118-120页 |
| 1.9 单克隆抗体间接荧光免疫法(IFA)检测GXHXN株N蛋白和G蛋白的抗原性 | 第120-121页 |
| 2 结果 | 第121-132页 |
| 2.1 样品检测 | 第121-122页 |
| 2.2 GXHXN株的致病性 | 第122-124页 |
| 2.3 GXHXN株的神经嗜性、生长特性与GXN119比较 | 第124-125页 |
| 2.4 GXHXN株的N和G蛋白的抗原性分析 | 第125-129页 |
| 2.5 GXHXN的全基因测序与遗传进化树分析 | 第129页 |
| 2.6 GXHXN株基因变异情况分析 | 第129-132页 |
| 讨论 | 第132-134页 |
| 小结 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-137页 |
| 附章二：拯救P-eGFP融合表达的重组狂犬病病毒株及应用于病毒中和抗体快速检测 | 第137-156页 |
| 摘要 | 第137-138页 |
| ABSTRACT | 第138-140页 |
| 2.1 材料与方法 | 第140-142页 |
| 2.1.1 主要试验材料 | 第140页 |
| 2.1.2 构建重组病毒的引物设计与合成 | 第140页 |
| 2.1.3 重组质粒pRV-eGFP的构建 | 第140-141页 |
| 2.1.4 重组病毒rRV-eGFP的拯救 | 第141页 |
| 2.1.5 标准RFFIT法检测犬血清抗狂犬病毒中和抗体的主要步骤 | 第141页 |
| 2.1.6 新型改良RFFIT-eGFP法检测犬血清抗狂犬病毒中和抗体的主要步骤 | 第141-142页 |
| 2.2 结果 | 第142-152页 |
| 2.2.1 重组狂犬病病毒rRV-eGFP的感染性cDNA成功构建 | 第142-143页 |
| 2.2.2 重组病毒rRV-eGFP成功拯救并鉴定携带eGFP基因 | 第143-146页 |
| 2.2.3 拯救重组病毒rRV-eGFP的P蛋白与eGFP蛋白融合表达 | 第146-147页 |
| 2.2.4 重组病毒rRV-eGFP与亲本毒株rRC-HL特性相似 | 第147-149页 |
| 2.2.5 RFFIT法和RFFIT-eGFP法检测结果的比较 | 第149-150页 |
| 2.2.6 RFFIT-eGFP法检测方法的优越性 | 第150-152页 |
| 讨论 | 第152-153页 |
| 小结 | 第153-154页 |
| 参考文献 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156-158页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第158-159页 |
