| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 绪论 | 第15-38页 |
| 1.1 罗氏沼虾养殖现状及其产业所面临问题 | 第15-18页 |
| 1.1.1 罗氏沼虾养殖现状 | 第15-16页 |
| 1.1.2 罗氏沼虾产业所面临问题 | 第16-18页 |
| 1.2 螺原体研究概述 | 第18-24页 |
| 1.2.1 螺原体的发现与报道 | 第18-19页 |
| 1.2.2 螺原体分类地位及生物学特性研究 | 第19-20页 |
| 1.2.3 螺原体的生物多样性 | 第20-23页 |
| 1.2.4 螺原体侵染机理研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3 水产甲壳动物螺原体研究进展 | 第24-27页 |
| 1.3.1 水产甲壳动物螺原体的发现与证实 | 第24-25页 |
| 1.3.2 罗氏沼虾螺原体研究进展 | 第25-26页 |
| 1.3.3 中华绒螯蟹螺原体侵染机理研究 | 第26-27页 |
| 1.4 水产甲壳类动物先天性免疫研究进展 | 第27-31页 |
| 1.4.1 免疫反应的启动 | 第27-28页 |
| 1.4.2 体液免疫 | 第28-30页 |
| 1.4.3 细胞免疫 | 第30-31页 |
| 1.5 小G蛋白研究进展 | 第31-35页 |
| 1.5.1 小G蛋白简介 | 第31-33页 |
| 1.5.2 Ran蛋白结构特点 | 第33-34页 |
| 1.5.3 Ran生物学功能研究 | 第34-35页 |
| 1.6 本论文的研究目的、内容、意义和技术路线 | 第35-38页 |
| 本文主要研究内容 | 第36-37页 |
| 本论文的实验技术路线 | 第37-38页 |
| 第2章 iTRAQ筛选螺原体感染前后罗氏沼虾血细胞的差异蛋白 | 第38-57页 |
| 2.1 材料和方法 | 第38-43页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第38页 |
| 2.1.2 主要器材及设备 | 第38-39页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 2.1.4 实验方法 | 第39-43页 |
| 2.2 实验结果 | 第43-55页 |
| 2.2.1 螺原体感染检测 | 第43页 |
| 2.2.2 总蛋白浓度测定及电泳检测 | 第43-44页 |
| 2.2.3 蛋白质鉴定结果 | 第44-55页 |
| 2.3 讨论 | 第55-57页 |
| 第3章 Far-western印迹筛选罗氏沼虾受体蛋白 | 第57-70页 |
| 3.1 材料 | 第58-61页 |
| 3.1.1 主要设备 | 第58页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第58-61页 |
| 3.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 3.2.1 罗氏沼虾血细胞总蛋白提取 | 第61页 |
| 3.2.2 螺原体菌液处理 | 第61页 |
| 3.2.3 BCA法测定蛋白浓度 | 第61页 |
| 3.2.4 Far-western印记筛选罗氏沼虾血细胞受体蛋白 | 第61-62页 |
| 3.2.5 蛋白萃取与质谱鉴定 | 第62-63页 |
| 3.3 实验结果 | 第63-67页 |
| 3.3.1 罗氏沼虾血细胞及螺原体菌液蛋白浓度测定 | 第63-65页 |
| 3.3.2 Far-Western印记筛选宿主受体蛋白 | 第65页 |
| 3.3.3 蛋白质谱测序结果 | 第65-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-70页 |
| 第4章 Beta-Actin蛋白原核表达及受体功能验证 | 第70-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 4.1.1 主要器材及设备 | 第70页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第70-71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 4.2.1 Beta-Actin基因扩增 | 第71页 |
| 4.2.2 Beta-Actin基因与pGEX-6P-1载体连接 | 第71页 |
| 4.2.3 pGEX-Beta-Actin连接产物转化至克隆感受态细胞 | 第71-72页 |
| 4.2.4 菌落PCR鉴定阳性克隆、测序分析 | 第72页 |
| 4.2.5 重组质粒原核表达 | 第72页 |
| 4.2.6 重组蛋白过柱纯化 | 第72-73页 |
| 4.2.7 Western blot分析蛋白纯化结果 | 第73页 |
| 4.2.8 Beta-Actin重组蛋白与螺原体体外结合实验 | 第73页 |
| 4.2.9 激光共聚焦验证罗氏沼虾血细胞Beta-Actin与螺原体相互作用 | 第73-74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-80页 |
| 4.3.1 Beta-Actin基因扩增 | 第74-75页 |
| 4.3.2 原核表达载体的构建 | 第75页 |
| 4.3.3 重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第75-77页 |
| 4.3.4 重组蛋白与螺原体体外结合 | 第77-78页 |
| 4.3.5 激光共聚焦验证共定位 | 第78-80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-81页 |
| 第5章 LGBP蛋白原核表达及受体功能验证 | 第81-98页 |
| 5.1 实验材料 | 第81-82页 |
| 5.1.1 主要器材及设备 | 第81-82页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第82页 |
| 5.2 实验方法 | 第82-87页 |
| 5.2.1 LGBP蛋白表达、纯化及验证 | 第82页 |
| 5.2.2 抗LGBP鼠多克隆抗体制备 | 第82-83页 |
| 5.2.3 LGBP重组蛋白与螺原体体外结合实验 | 第83页 |
| 5.2.4 激光共聚焦验证罗氏沼虾血细胞LGBP与螺原体相互作用 | 第83页 |
| 5.2.5 LGBP双链RNA合成及纯化 | 第83-84页 |
| 5.2.6 罗氏沼虾LGBP基因干扰 | 第84-85页 |
| 5.2.7 LGBP基因干扰对于螺原感染的影响 | 第85-86页 |
| 5.2.8 罗氏沼虾死亡率统计 | 第86页 |
| 5.2.9 螺原体侵染期间罗氏沼虾LGBP基因表达变化 | 第86-87页 |
| 5.3 实验结果 | 第87-95页 |
| 5.3.1 LGBP基因扩增 | 第87页 |
| 5.3.2 原核表达载体的构建 | 第87-88页 |
| 5.3.3 重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第88-89页 |
| 5.3.4 重组蛋白与螺原体体外结合 | 第89-90页 |
| 5.3.5 激光共聚焦验证共定位 | 第90-92页 |
| 5.3.6 MrLGBP双链RNA合成 | 第92页 |
| 5.3.7 MrLGBP基因干扰效果检测 | 第92-93页 |
| 5.3.8 MrLGBP基因干扰对螺原体侵染数量的影响 | 第93-94页 |
| 5.3.9 MrLGBP基因干扰后感染螺原体统计罗氏沼虾死亡率 | 第94-95页 |
| 5.3.10 MrLGBP基因干扰后感染螺原体检测MrLGBP基因表达变化 | 第95页 |
| 5.4 讨论 | 第95-98页 |
| 第6章 Ran基因克隆、蛋白原核表达及功能研究 | 第98-111页 |
| 6.1 实验材料 | 第98-99页 |
| 6.1.1 主要器材及设备 | 第98-99页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第99页 |
| 6.2 实验方法 | 第99-102页 |
| 6.2.1 Ran简并引物设计 | 第99页 |
| 6.2.2 中间部分cDNA序列扩增 | 第99-100页 |
| 6.2.3 cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增基因全长 | 第100-102页 |
| 6.2.4 Ran蛋白表达、纯化及验证 | 第102页 |
| 6.2.5 Ran重组蛋白与螺原体体外结合实验 | 第102页 |
| 6.2.6 Ran双链RNA合成及纯化 | 第102页 |
| 6.2.7 罗氏沼虾Ran基因干扰 | 第102页 |
| 6.2.8 Ran基因干扰对于螺原侵染的影响 | 第102页 |
| 6.2.9 罗氏沼虾死亡率统计 | 第102页 |
| 6.3 实验结果 | 第102-109页 |
| 6.3.1 Ran简并引物设计及部分cDNA序列扩增 | 第102-104页 |
| 6.3.2 RACE扩增Ran cDNA序列全长 | 第104页 |
| 6.3.3 MrRan cDNA序列分析 | 第104-105页 |
| 6.3.4 MrRan蛋白原核表达及纯化 | 第105-106页 |
| 6.3.5 MrRan重组蛋白与螺原体体外结合 | 第106-107页 |
| 6.3.6 MrRan基因干扰效果检测 | 第107-108页 |
| 6.3.7 MrRan基因干扰对螺原体侵染数量的影响 | 第108页 |
| 6.3.8 MrRan基因干扰后感染螺原体统计罗氏沼虾死亡率 | 第108-109页 |
| 6.4 讨论 | 第109-111页 |
| 第7章 Far-western印迹筛选螺原体配体蛋白及配体蛋白功能验证 | 第111-127页 |
| 7.1 实验材料 | 第112-113页 |
| 7.1.1 主要器材及设备 | 第112页 |
| 7.1.2 主要试剂 | 第112-113页 |
| 7.2 实验方法 | 第113-116页 |
| 7.2.1 中华绒螯蟹螺原体总蛋白提取 | 第113页 |
| 7.2.2 Far-Western印记筛选螺原体配体蛋白 | 第113页 |
| 7.2.3 蛋白萃取与质谱鉴定 | 第113-114页 |
| 7.2.4 螺原体基因组DNA的提取 | 第114页 |
| 7.2.5 配体蛋白重组表达 | 第114-115页 |
| 7.2.6 配体蛋白竞争性实验 | 第115-116页 |
| 7.2.7 烯醇酶在螺原体不同组分中分布 | 第116页 |
| 7.3 实验结果 | 第116-124页 |
| 7.3.1 螺原体总蛋白提取 | 第116-117页 |
| 7.3.2 Far-Western印记筛选螺原体配体蛋白 | 第117页 |
| 7.3.3 配体蛋白质谱测序结果 | 第117-119页 |
| 7.3.4 重组质粒碱基突变 | 第119-121页 |
| 7.3.5 重组蛋白的表达、纯化 | 第121-122页 |
| 7.3.6 配体蛋白质竞争性实验 | 第122-124页 |
| 7.3.7 烯醇酶在螺原体中分布情况 | 第124页 |
| 7.4 讨论 | 第124-127页 |
| 第8章 结论 | 第127-130页 |
| 8.1. iTRAQ筛选螺原体感染前后罗氏沼虾血细胞的差异蛋白 | 第127页 |
| 8.2. Far-western印迹筛选罗氏沼虾受体蛋白 | 第127页 |
| 8.3. Beta-Actin蛋白原核表达及受体功能验证 | 第127-128页 |
| 8.4. LGBP蛋白原核表达及受体功能研究 | 第128页 |
| 8.5. Ran基因克隆、蛋白原核表达及功能研究 | 第128页 |
| 8.6. Far-western印记筛选螺原体配体蛋白及配体蛋白功能验研究 | 第128页 |
| 本研究的主要创新点 | 第128-129页 |
| 进一步研究方向 | 第129-130页 |
| 附录A | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-151页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第151-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
