| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 一 综述 | 第11-21页 |
| 1 自交不亲和研究 | 第11-16页 |
| 1.1 GSI研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 SSI研究进展 | 第14-16页 |
| 2 全基因组家族分析 | 第16-19页 |
| 2.1 生物信息学研究进展 | 第17-18页 |
| 2.2 生物信息学常用分析软件 | 第18-19页 |
| 3 研究目的与意义 | 第19页 |
| 4 实验思路及技术路线 | 第19-21页 |
| 二 材料与方法 | 第21-37页 |
| 1 实验材料 | 第21页 |
| 2 溶剂配制 | 第21-22页 |
| 3 试验方法 | 第22-37页 |
| 3.1 甜橙全基因组家族生物信息学分析 | 第22-25页 |
| 3.1.1 Cs SRKs家族基因识别 | 第22页 |
| 3.1.2 Cs SRKs家族基因染色体定位与重命名 | 第22-23页 |
| 3.1.3 多序列比对与聚类 | 第23页 |
| 3.1.4 一级结构预测 | 第23-24页 |
| 3.1.5 顺式作用元件分析 | 第24页 |
| 3.1.6 基因结构与Motif查找 | 第24-25页 |
| 3.2 全基因组家族表达量分析 | 第25-29页 |
| 3.2.1 RNA抽提 | 第25-27页 |
| 3.2.2 去除RNA中的DNA杂质 | 第27页 |
| 3.2.3 RNA反转录c DNA | 第27-28页 |
| 3.2.4 家族基因表达谱分析 | 第28页 |
| 3.2.5 半定量分析 | 第28页 |
| 3.2.6 qRT-PCR分析 | 第28-29页 |
| 3.3 沙田柚Cs SRK基因的克隆 | 第29-31页 |
| 3.3.1 RNA提取与反转录 | 第29页 |
| 3.3.2 PCR全长扩增，DNA胶回收，TA克隆及菌液测序 | 第29-31页 |
| 3.4 Cs SRK原核表达载体构建 | 第31-34页 |
| 3.4.1 表达载体选择与引物设计 | 第31-32页 |
| 3.4.2 PCR扩增，产物回收，TA克隆及菌液测序 | 第32页 |
| 3.4.3 原核表达质粒扩增 | 第32页 |
| 3.4.4 质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.4.5 质粒双酶切 | 第33页 |
| 3.4.6 酶切产物的回收与T4 连接 | 第33页 |
| 3.4.7 重组质粒转化、验证阳性及测序 | 第33-34页 |
| 3.4.8 质粒DNA的提取及转化 | 第34页 |
| 3.5 原核表达条件优化及SDS-PAGE检测 | 第34-37页 |
| 3.5.1 SDS-PAGE制样 | 第34-35页 |
| 3.5.2 菌落SDS-PAGE | 第35页 |
| 3.5.3 制SDS-PAGE胶 | 第35-36页 |
| 3.5.4 考马斯亮蓝染色 | 第36-37页 |
| 三 结果与分析 | 第37-66页 |
| 1 生物信息学分析 | 第37-52页 |
| 1.1 基因家族成员识别 | 第37页 |
| 1.2 染色体定位与基因重命名 | 第37-38页 |
| 1.3 基因一级结构预测 | 第38-44页 |
| 1.4 基因家族多序列比对 | 第44页 |
| 1.5 基因结构与Motif构型 | 第44-46页 |
| 1.6 启动子顺式作用元件分析 | 第46-52页 |
| 2 SRK基因家族表达量分析 | 第52-59页 |
| 2.1 RNA抽提 | 第52-53页 |
| 2.2 半定量PCR | 第53页 |
| 2.3 实时定量qRT-PCR | 第53-59页 |
| 3 原核表达分析 | 第59-60页 |
| 3.1 Cs SRK基因扩增 | 第59页 |
| 3.2 Cs SRK/18T载体构建 | 第59页 |
| 3.3 质粒双酶切 | 第59-60页 |
| 3.4 构建重组质粒Cs SRK/PGEX-6P-1 | 第60页 |
| 3.5 表达载体Cs SRK/PGEX-6P-1 的构建 | 第60页 |
| 4 载体表达条件的优化 | 第60-61页 |
| 5 蛋白质性质预测 | 第61-66页 |
| 5.1 蛋白质结构功能域分析 | 第61页 |
| 5.2 跨模性预测 | 第61页 |
| 5.3 信号肽位点预测 | 第61页 |
| 5.4 磷酸化位点预测 | 第61-64页 |
| 5.5 二级结构预测 | 第64-65页 |
| 5.6 三级结构预测 | 第65-66页 |
| 四 讨论 | 第66-68页 |
| 4.1 沙田柚自交不亲和性 | 第66页 |
| 4.2 沙田柚S位点基因时空表达 | 第66-67页 |
| 4.3 原核表达及蛋白纯化 | 第67页 |
| 4.4 家族生物信息学分析 | 第67-68页 |
| 五 结论及展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 附录 | 第78-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
