| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写名词表 | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-24页 |
| 1.1 植物应答低磷胁迫研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1.1 植物根系形态与结构变化 | 第10页 |
| 1.1.2 植物生理生化响应 | 第10-11页 |
| 1.1.3 植物激素调控 | 第11-12页 |
| 1.1.4 低磷胁迫下分子应答与调控 | 第12-15页 |
| 1.1.4.1 磷转运相关基因的表达与调控 | 第12-13页 |
| 1.1.4.2 磷转运相关转录因子的表达与调控 | 第13-14页 |
| 1.1.4.3 microRNA参与植物耐低磷胁迫途径 | 第14-15页 |
| 1.2 植物MYB转录因子研究进展 | 第15-22页 |
| 1.2.1 植物转录因子特征及类型 | 第15-17页 |
| 1.2.1.1 DNA结合域 | 第16页 |
| 1.2.1.2 转录调控区 | 第16-17页 |
| 1.2.1.3 核定位信号 | 第17页 |
| 1.2.1.4 寡聚化位点 | 第17页 |
| 1.2.1.5 植物转录因子类型 | 第17页 |
| 1.2.2 植物MYB类转录因子的结构特征 | 第17-19页 |
| 1.2.3 植物MYB转录因子的进化 | 第19-20页 |
| 1.2.4 植物MYB转录因子的功能 | 第20-22页 |
| 1.2.4.1 参与植物生长发育 | 第20页 |
| 1.2.4.2 参与植物初生代谢与次生代谢 | 第20-21页 |
| 1.2.4.3 参与植物抗逆反应 | 第21-22页 |
| 1.3 马尾松分子遗传学方向研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究内容、目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 马尾松磷转运相关基因筛选 | 第24-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-31页 |
| 2.1.1 试验材料与处理方法 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂及仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.3 总RNA提取及检测 | 第24-25页 |
| 2.1.4 cDNA的合成 | 第25-26页 |
| 2.1.5 差异表达序列选择 | 第26页 |
| 2.1.6 基因表达分析 | 第26-31页 |
| 2.1.6.1 低磷胁迫相关基因引物设计 | 第27页 |
| 2.1.6.2 内参基因的选择 | 第27-28页 |
| 2.1.6.3 RT-PCR体系建立 | 第28-29页 |
| 2.1.6.4 低磷胁迫相关基因RT-PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.1.6.5 荧光定量PCR体系建立 | 第30-31页 |
| 2.1.6.6 基因相对表达量的分析方法 | 第31页 |
| 2.2 结果与分析 | 第31-36页 |
| 2.2.1 马尾松总RNA质量检测 | 第31页 |
| 2.2.2 内参基因半定量分析 | 第31-32页 |
| 2.2.3 半定量RT-PCR体系建立 | 第32-33页 |
| 2.2.4 低磷胁迫相关基因RT-PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.2.5 低磷胁迫相关MYB转录因子荧光定量PCR检测 | 第34-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-38页 |
| 2.3.1 基因表达方法分析 | 第36-37页 |
| 2.3.2 MYB基因应答低磷胁迫分析 | 第37-38页 |
| 第三章 PmMYB169基因的克隆及表达分析 | 第38-58页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-44页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第38页 |
| 3.1.2 实验试剂及仪器设备 | 第38页 |
| 3.1.3 PmMYB169全长克隆 | 第38-44页 |
| 3.1.3.1 总RNA提取及检测 | 第39页 |
| 3.1.3.2 RACE-Ready c DNA获得 | 第39-40页 |
| 3.1.3.3 RACE扩增片段 | 第40-41页 |
| 3.1.3.4 PCR扩增产物的回收 | 第41-42页 |
| 3.1.3.5 PCR产物连接与转化 | 第42页 |
| 3.1.3.6 质粒提取 | 第42-43页 |
| 3.1.3.7 序列分析 | 第43-44页 |
| 3.1.4 PmMYB169时空性表达分析 | 第44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-56页 |
| 3.2.1 总RNA质量检测 | 第44-45页 |
| 3.2.2 PmMYB169全长克隆 | 第45-47页 |
| 3.2.3 PmMYB169生物信息学分析 | 第47-55页 |
| 3.2.3.0 PmMYB169蛋白结构域分析 | 第47页 |
| 3.2.3.1 PmMYB169编码氨基酸序列比对 | 第47-50页 |
| 3.2.3.2 PmMYB169蛋白结构及理化特性预测 | 第50页 |
| 3.2.3.3 PmMYB169蛋白疏水性预测 | 第50-51页 |
| 3.2.3.4 PmMYB169蛋白跨膜性预测 | 第51-52页 |
| 3.2.3.5 PmMYB169蛋白磷酸化修饰预测 | 第52页 |
| 3.2.3.6 PmMYB169蛋白信号肽预测 | 第52-53页 |
| 3.2.3.7 PmMYB169亚细胞定位预测分析 | 第53页 |
| 3.2.3.8 PmMYB169二级结构预测 | 第53-54页 |
| 3.2.3.9 PmMYB169三级结构预测 | 第54-55页 |
| 3.2.4 PmMYB169时空表达分析 | 第55-56页 |
| 3.3 讨论 | 第56-58页 |
| 3.3.1 PmMYB169全长序列克隆与序列分析 | 第56-57页 |
| 3.3.2 PmMYB169时空表达分析 | 第57-58页 |
| 第四章 PmMYB169基因表达载体构建 | 第58-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第58-63页 |
| 4.1.1 质粒与菌株 | 第58页 |
| 4.1.2 实验试剂及仪器设备 | 第58页 |
| 4.1.3 添加酶切位点引物设计 | 第58-59页 |
| 4.1.4 PmMYB169基因T载体克隆 | 第59-61页 |
| 4.1.4.1 PmMYB169基因ORF扩增 | 第59页 |
| 4.1.4.2 PCR扩增产物的回收 | 第59-60页 |
| 4.1.4.3 T1载体克隆 | 第60-61页 |
| 4.1.5 目的片段和载体双酶切 | 第61-62页 |
| 4.1.6 酶切产物的纯化 | 第62页 |
| 4.1.7 目的片段连接 | 第62-63页 |
| 4.1.8 重组质粒转化和菌落PCR鉴定 | 第63页 |
| 4.1.9 重组子鉴定 | 第63页 |
| 4.2 结果与分析 | 第63-66页 |
| 4.2.1 添加酶切位点的PCR扩增 | 第63-64页 |
| 4.2.2 PCR产物回收及T1载体连接 | 第64-65页 |
| 4.2.3 PmMYB169与表达载体pCAMBIA1301连接 | 第65-66页 |
| 4.2.3.1 pEASY-T1-PmMYB169质粒与pCAMBIA1301质粒双酶切 | 第65页 |
| 4.2.3.2 pCAMBIA1301-PmMYB169菌落PCR鉴定 | 第65-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-68页 |
| 4.3.1 表达载体构建策略 | 第66-68页 |
| 第五章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 主要结论 | 第68页 |
| 5.2 后期工作展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
