| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1.引言 | 第12-17页 |
| 1.1 泛素化系统简介 | 第12-14页 |
| 1.2 Lsb1功能以及泛素化研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 SILAC定量蛋白质组学与泛素链 | 第15-16页 |
| 1.4 课题研究内容和创新及意义 | 第16-17页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第16页 |
| 1.4.2 课题意义 | 第16-17页 |
| 2.实验仪器、材料和方法 | 第17-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.2 实验仪器及试剂 | 第18-21页 |
| 2.3 方法 | 第21-29页 |
| 2.3.1 PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.3.2 目的片段的回收 | 第22页 |
| 2.3.3 化学转化与筛选 | 第22-23页 |
| 2.3.4 Lsb1-HB质粒的构建 | 第23页 |
| 2.3.5 Lsb1位点突变质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.3.6 Lsb1-HB生长曲线测定 | 第24页 |
| 2.3.7 Lsb1-HB SILAC标记 | 第24页 |
| 2.3.8 Lsb1-HB串联纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.9 银染 | 第25页 |
| 2.3.10 Western Blot检测样品信号 | 第25-26页 |
| 2.3.11 Lsb1-HB质谱样品制备 | 第26页 |
| 2.3.12 Stage tip分离 | 第26页 |
| 2.3.13 Lsb1-HB LC-MS/MS检测 | 第26-27页 |
| 2.3.14 SRM定向测定泛素链的变化 | 第27页 |
| 2.3.15 数据分析 | 第27-28页 |
| 2.3.16 GO功能分析 | 第28页 |
| 2.3.17 点板实验 | 第28-29页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第29-57页 |
| 3.1 Ubp2参与Lsb1泛素化修饰调控 | 第29-31页 |
| 3.2 Lsb1敲除菌株和过表达菌株的构建 | 第31-35页 |
| 3.2.1 Lsb1敲除菌株的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.2 Lsb1-HB及其位点突变菌株的构建 | 第32-35页 |
| 3.3 Lsb1的变性纯化及质谱分析 | 第35-40页 |
| 3.3.1 Lsb1及其突变株的变性纯化 | 第35-37页 |
| 3.3.2 Lsb1纯化样品的质谱鉴定 | 第37-40页 |
| 3.4 SILAC定量研究Lsb1泛素化水平 | 第40-44页 |
| 3.5 SILAC定量研究Lsb1相互作用蛋白 | 第44-48页 |
| 3.5.1 筛选Lsb1相互作用蛋白流程图 | 第44-45页 |
| 3.5.2 Lsb1相互作用蛋白的筛选和功能分析 | 第45-47页 |
| 3.5.3 参与Lsb1泛素化调控的去泛素化酶 | 第47-48页 |
| 3.6 Lsb1特定泛素化位点的泛素链结合蛋白的筛选 | 第48-55页 |
| 3.6.1 筛选策略 | 第50-51页 |
| 3.6.2 Lsb1泛素化位点上泛素链的结合蛋白筛选 | 第51-52页 |
| 3.6.3 Lsb1泛素链特异性底物的功能分析 | 第52-55页 |
| 3.7 Lsb1敲除和过表达菌株的表型 | 第55-57页 |
| 3.7.1 Lsb1敲除和过表达菌株生长曲线测定 | 第55页 |
| 3.7.2 Lsb1敲除和过表达菌株影响酵母支链氨基酸的合成 | 第55-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 Lsb1新的泛素化位点的发现 | 第57页 |
| 4.2 突变Lsb1的主要泛素化位点影响Lsb1的含量 | 第57-58页 |
| 4.3 Lsb1泛素链及其DUBs的研究 | 第58-59页 |
| 4.4 Lsb1相互作用蛋白研究 | 第59页 |
| 4.5 Lsb1泛素化位点上泛素链的结合蛋白筛选和表型验证 | 第59-61页 |
| 5. 结论 | 第61-62页 |
| 6. 参考文献 | 第62-66页 |
| 7. 附录 | 第66-69页 |
| 附录 1. SRM靶向检测泛素、泛素链以及Lsb1泛素化位点的含量 | 第66-67页 |
| 附录 2. 潜在的Lsb1泛素链结合蛋白 | 第67-69页 |
| 个人简历 | 第69-70页 |
| 科研成果和所获荣誉 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 综述 | 第73-84页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
