| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 DNA甲基化 | 第12-15页 |
| 1.1.1 植物DNA甲基化 | 第12-13页 |
| 1.1.2 植物DNA去甲基化 | 第13-15页 |
| 1.2 植物DNA甲基化相关调控因子 | 第15-21页 |
| 1.2.1 胞嘧啶甲基转移酶类 | 第15-16页 |
| 1.2.1.1 甲基转移酶 | 第15页 |
| 1.2.1.2 染色质域甲基转移酶 | 第15-16页 |
| 1.2.1.3 域重排甲基转移酶 | 第16页 |
| 1.2.2 RdDM途径中的调控因子 | 第16-17页 |
| 1.2.3 组蛋白修饰因子 | 第17-20页 |
| 1.2.3.1 组蛋白甲基转移酶 | 第18页 |
| 1.2.3.2 组蛋白乙酰基转移酶 | 第18-19页 |
| 1.2.3.3 组蛋白脱乙酰基酶 | 第19-20页 |
| 1.2.4 染色质重塑酶 | 第20页 |
| 1.2.5 其他DNA甲基化调控因子 | 第20-21页 |
| 1.3 非生物胁迫与脱落酸 | 第21-23页 |
| 1.4 SAG蛋白与脱落酸 | 第23页 |
| 1.5 非生物胁迫与DNA甲基化 | 第23-25页 |
| 1.6 本实验的目的意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 所用菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 引物 | 第27-28页 |
| 2.1.5 网络资源 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-48页 |
| 2.2.1 利用CTAB法植物基因组的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2.1 利用TRIZOL法提取RNA | 第30页 |
| 2.2.2.2 植物总RNA提取试剂盒提RNA | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 RNA中基因组DNA的去除 | 第31页 |
| 2.2.2.4 RNA反转录 | 第31页 |
| 2.2.3 实时定量PCR | 第31-32页 |
| 2.2.4 载体构建 | 第32-34页 |
| 2.2.4.1 获得目的DNA片段的方法 | 第32-33页 |
| 2.2.4.2 DNA片段的胶回收 | 第33-34页 |
| 2.2.4.3 目的片段平末端加A | 第34页 |
| 2.2.4.4 目的DNA片段与不同克隆载体的连接 | 第34页 |
| 2.2.5 大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备与转化 | 第34-36页 |
| 2.2.5.1 大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌DH5α 的转化 | 第35页 |
| 2.2.5.3 菌液PCR方法筛选阳性克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.6 质粒DNA的提取 | 第36-38页 |
| 2.2.6.1 小量法提质粒DNA | 第36页 |
| 2.2.6.2 大量法提质粒DNA | 第36-37页 |
| 2.2.6.3 质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| 2.2.6.4 酶切回收的片段与表达载体的连接 | 第37-38页 |
| 2.2.7 植物表达载体转化农杆菌 | 第38页 |
| 2.2.7.1 GV3101感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.7.2 农杆菌的冻融法转化 | 第38页 |
| 2.2.8 农杆菌介导的拟南芥花序侵染 | 第38-39页 |
| 2.2.9 PCR鉴定转化纯合植株和T-DNA插入纯合突变体 | 第39-40页 |
| 2.2.9.1 PCR鉴定转化植株 | 第39页 |
| 2.2.9.2 PCR鉴定拟南芥T-DNA插入纯合植株 | 第39-40页 |
| 2.2.10 激光共聚焦显微镜观察GFP定位 | 第40-41页 |
| 2.2.11 CHOP-PCR和基于CHOP-PCR的DNA甲基化异常突变体筛选 | 第41-43页 |
| 2.2.12 亚硫酸氢盐处理基因组 | 第43-44页 |
| 2.2.13 亚硫酸盐测序PCR | 第44-46页 |
| 2.2.14 酵母双杂交实验 | 第46-48页 |
| 2.2.14.1 酵母双杂交载体构建 | 第46页 |
| 2.2.14.2 PEG/LiAc法制备酵母感受态细胞 | 第46页 |
| 2.2.14.3 小量法酵母转化和点板 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-57页 |
| 3.1 CHOP-PCR筛选发现sag和a1基因组DT-77 等位点DNA甲基化程度升高 | 第48页 |
| 3.2 BSP分析发现突变体基因组NEW DT-77 等区域甲基化程度异常 | 第48-51页 |
| 3.3 AtSAG序列分析及蛋白结构预测 | 第51-53页 |
| 3.3.1 AtSAG的启动子序列分析 | 第51-52页 |
| 3.3.2 AtSAG的蛋白序列分析及蛋白结构预测 | 第52-53页 |
| 3.4 sag互补株系可互补SAG缺失的表型 | 第53-54页 |
| 3.5 sag中DNA去甲基化酶基因ROS1的表达量下调 | 第54页 |
| 3.6 SAG亚细胞定位于内质网 | 第54-55页 |
| 3.7 酵母双杂交筛选SAG的互作蛋白 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表论文及成果 | 第71页 |
