| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 口蹄疫及口蹄疫诊断现状 | 第14-16页 |
| 1.1.1 口蹄疫 | 第14页 |
| 1.1.2 口蹄疫诊断现状 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 检测FMDV感染的传统方法 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 口蹄疫现场诊断技术 | 第15-16页 |
| 1.2 化学发光技术在人兽共患病诊断中的应用 | 第16-21页 |
| 1.2.1 化学发光技术概述 | 第16页 |
| 1.2.2 化学发光的原理 | 第16-17页 |
| 1.2.3 发光剂的种类 | 第17页 |
| 1.2.3.1 鲁米诺(luminuo)及其衍生物 | 第17页 |
| 1.2.3.2 1,2-二氧环乙烷衍生物（AMPPD） | 第17页 |
| 1.2.3.3 吖啶酯 | 第17页 |
| 1.2.3.4 三联吡啶钌 | 第17页 |
| 1.2.4 化学发光最新相关技术 | 第17-19页 |
| 1.2.4.1 纳米技术 | 第17-18页 |
| 1.2.4.2 免疫传感器技术 | 第18页 |
| 1.2.4.3 流动注射和毛细管技术 | 第18页 |
| 1.2.4.4 试纸条与微流控技术 | 第18-19页 |
| 1.2.5 相关疫病的化学发光检测方法 | 第19-21页 |
| 1.2.5.1 禽流感H1N1病毒化学发光检测方法 | 第19页 |
| 1.2.5.2 乙肝表面抗原（HBsAg）化学发光检测方法 | 第19页 |
| 1.2.5.3 结核杆菌化学发光检测方法 | 第19-20页 |
| 1.2.5.4 布鲁氏菌化学发光检测方法 | 第20页 |
| 1.2.5.5 戊型肝炎和耶尔森氏菌化学发光检测方法 | 第20页 |
| 1.2.5.6 李斯特菌化学发光检测方法 | 第20页 |
| 1.2.5.7 多种腹泻病原化学发光检测方法 | 第20-21页 |
| 1.2.5.8 猪细小病毒化学发光检测方法 | 第21页 |
| 1.2.5.9 猪圆环病毒化学发光检测方法 | 第21页 |
| 1.3 总结与展望 | 第21-22页 |
| 第二章 口蹄疫非结构蛋白 3ABC和 2C的表达、纯化以及免疫反应性的鉴定 | 第22-32页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 FMDV RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 引物的设计 | 第22-23页 |
| 2.2.3 2C目的基因的扩增 | 第23页 |
| 2.2.4 3ABC全长基因的定点突变和扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.5 目的片段与PMD18T载体的连接与测序 | 第24页 |
| 2.2.6 转化、摇菌 | 第24-25页 |
| 2.2.7 菌落PCR鉴定并测序 | 第25页 |
| 2.2.8 提取质粒 | 第25页 |
| 2.2.9 表达载体与目的片段的酶切、连接。 | 第25-26页 |
| 2.2.10 转化、摇菌、菌落PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.2.11 阳性质粒的小规模诱导表达 | 第26页 |
| 2.2.12 蛋白的大规模表达 | 第26-27页 |
| 2.2.13 超声破碎 | 第27页 |
| 2.2.14 蛋白纯化 | 第27页 |
| 2.2.15 western blot | 第27-28页 |
| 2.2.16 ELISA | 第28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 全长 3ABC和全长 2C目的基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.2 3ABC突变结果 | 第29页 |
| 2.3.3 蛋白的表达纯化与western blot鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 ELISA鉴定融合 3ABC与融合 2C蛋白的免疫反应性 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 口蹄疫 3A、3B区域表位蛋白的表达、纯化以及免疫反应性的鉴定 | 第32-36页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.1 主要试剂及仪器 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 表位的选择与基因合成 | 第32-33页 |
| 3.2.2 表达载体的构建 | 第33页 |
| 3.2.3 蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| 3.2.4 蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.5 Western blot鉴定五组表位蛋白的免疫反应性。 | 第34页 |
| 3.2.6 ELISA鉴定五组表位蛋白的免疫反应性。 | 第34页 |
| 3.3 结果 | 第34-35页 |
| 3.3.1 五组表位蛋白的表达、纯化、免疫学鉴定情况： | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 检测猪FMDV感染的化学发光免疫分析方法的建立 | 第36-45页 |
| 4.1 材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 已知背景猪血清样品 | 第36页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 3ABC-CLIA方法的建立 | 第37-38页 |
| 4.2.1.1 棋盘滴定法 | 第37页 |
| 4.2.1.2 已知背景血清的检测 | 第37-38页 |
| 4.2.1.3 临界值的确定 | 第38页 |
| 4.2.2 3ABC-2C-CLIA方法的建立 | 第38-39页 |
| 4.2.2.1 3ABC-2C-CLIA检测条件的优化 | 第38页 |
| 4.2.2.2 3ABC-2C临界值的确定 | 第38页 |
| 4.2.2.3 3ABC-2C-CLIA分析敏感性的鉴定 | 第38页 |
| 4.2.2.4 重复性的鉴定 | 第38页 |
| 4.2.2.5 3ABC-2C-CLIA稳定性的鉴定 | 第38-39页 |
| 4.2.2.6 3ABC-2C-CLIA与 3ABC-CLIA、商品化试剂盒的比对实验 | 第39页 |
| 4.2.2.7 早期诊断的比较 | 第39页 |
| 4.3 实验结果 | 第39-43页 |
| 4.3.1 3ABC-CLIA最佳检测条件的确定 | 第39页 |
| 4.3.2 临界值、诊断敏感性、诊断特异性的判定 | 第39-41页 |
| 4.3.3 分析敏感性的比较 | 第41-42页 |
| 4.3.4 重复性鉴定 | 第42页 |
| 4.3.5 稳定性鉴定 | 第42页 |
| 4.3.6 比对实验 | 第42-43页 |
| 4.3.7 FMDV感染动物的血清学监测 | 第43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 检测牛FMDV感染的化学发光免疫分析方法的建立 | 第45-49页 |
| 5.1 材料 | 第45页 |
| 5.1.1 已知背景牛血清 | 第45页 |
| 5.2 方法 | 第45页 |
| 5.3 结果 | 第45-48页 |
| 5.3.1 检测条件的确定 | 第45页 |
| 5.3.2 临界值、诊断敏感性、特异性的确定 | 第45-46页 |
| 5.3.3 分析敏感性的鉴定 | 第46-47页 |
| 5.3.4 比对实验 | 第47-48页 |
| 5.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 全文讨论 | 第49-51页 |
| 第七章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
