| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1、前言 | 第14-23页 |
| 1.1 多粘类芽孢杆菌简介 | 第14页 |
| 1.2 多粘类芽孢杆菌产生的生物活性物质 | 第14-19页 |
| 1.2.1 多肽类 | 第14-18页 |
| 1.2.1.1 多粘菌素 | 第15页 |
| 1.2.1.2 杀镰孢菌素 | 第15-16页 |
| 1.2.1.3 环杆菌素 | 第16页 |
| 1.2.1.4 Paenibacillin | 第16页 |
| 1.2.1.5 Gavaserin和saltavalin | 第16-17页 |
| 1.2.1.6 乔利肽菌素 | 第17页 |
| 1.2.1.7 多肽菌素 | 第17页 |
| 1.2.1.8 谷缬菌素 | 第17页 |
| 1.2.1.9 其他 | 第17-18页 |
| 1.2.2 蛋白类 | 第18页 |
| 1.2.3 核苷类 | 第18页 |
| 1.2.4 其他 | 第18-19页 |
| 1.3 菌种选育 | 第19页 |
| 1.4 发酵过程调控 | 第19-20页 |
| 1.5 多粘类芽孢杆菌产生的生物活性物质的分离、纯化 | 第20-21页 |
| 1.6 本课题主要的研究内容及路线 | 第21-23页 |
| 2、SIIA-1408 的分类鉴定 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 菌种 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 培养特征的观察 | 第23-24页 |
| 2.2.2 形态特征的观察 | 第24页 |
| 2.2.3 生理生化特征的考察 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 生长温度的考察 | 第24页 |
| 2.2.3.2 耐酸碱度的考察 | 第24页 |
| 2.2.3.3 耐盐性的考察 | 第24页 |
| 2.2.3.4 需氧性及运动性考察 | 第24页 |
| 2.2.3.5 触酶试验 | 第24页 |
| 2.2.3.6 柠檬酸盐的利用 | 第24页 |
| 2.2.3.7 甲基红试验 | 第24-25页 |
| 2.2.3.8 V-P试验 | 第25页 |
| 2.2.3.9 吲哚试验 | 第25页 |
| 2.2.3.10 硫化氢试验 | 第25页 |
| 2.2.3.11 硝酸盐还原试验 | 第25页 |
| 2.2.3.12 淀粉水解试验 | 第25页 |
| 2.2.3.13 糖、醇类发酵试验 | 第25页 |
| 2.2.4 基于 16S rRNA基因的分子生物学鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.4.1 总DNA的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 16S rRNA基因的扩增及序列测定 | 第26页 |
| 2.2.4.3 制作系统发育树 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-29页 |
| 2.3.1 菌体的培养特征 | 第27页 |
| 2.3.2 菌株的形态特征 | 第27页 |
| 2.3.3 生理生化特征 | 第27-28页 |
| 2.3.4 测序结果 | 第28-29页 |
| 2.3.5 系统发育树的构建 | 第29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-31页 |
| 3、Paenibacillus polymyxa SIIA-1408 产生的主要抗菌活性物质的研究 | 第31-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 菌种 | 第31页 |
| 3.1.2 培养基 | 第31页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 HPLC分析方法 | 第32页 |
| 3.2.2 发酵液的预处理 | 第32-33页 |
| 3.2.2.1 预处理方法的选择 | 第32页 |
| 3.2.2.2 不同浸提有机溶剂的影响 | 第32页 |
| 3.2.2.3 有机溶剂与发酵液比例的影响 | 第32-33页 |
| 3.2.3 初步分离工艺 | 第33-35页 |
| 3.2.3.1 树脂的预处理方法 | 第33页 |
| 3.2.3.2 树脂的筛选 | 第33-34页 |
| 3.2.3.3 动态吸附与解吸条件的筛选 | 第34-35页 |
| 3.2.3.4 树脂的吸附与解吸工艺验证 | 第35页 |
| 3.2.4 反相硅胶柱层析工艺 | 第35-36页 |
| 3.2.4.1 上样方法的考察 | 第35页 |
| 3.2.4.2 高径比的考察 | 第35页 |
| 3.2.4.3 上样量的考察 | 第35页 |
| 3.2.4.4 洗脱流速的考察 | 第35-36页 |
| 3.2.4.5 洗脱液中乙腈浓度的考察 | 第36页 |
| 3.2.4.6 反相硅胶层析柱分离、纯化工艺验证 | 第36页 |
| 3.2.5 高压制备色谱及结构验证 | 第36页 |
| 3.2.6 抗菌活性的考察 | 第36-37页 |
| 3.3 | 第37-46页 |
| 3.3.1 HPLC 分析方法 | 第37页 |
| 3.3.2 发酵液的预处理 | 第37-39页 |
| 3.3.2.1 预处理方法分选择 | 第37-38页 |
| 3.3.2.2 不同浸提有机溶剂的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.2.3 有机溶剂与发酵液比例的影响 | 第39页 |
| 3.3.3 初步分离工艺 | 第39-43页 |
| 3.3.3.1 树脂的筛选 | 第39-40页 |
| 3.3.3.2 动态吸附与解吸条件的优化 | 第40-43页 |
| 3.3.4 反相硅胶柱层析 | 第43-46页 |
| 3.3.4.1 上样方法的考察结果 | 第43页 |
| 3.3.4.2 高径比的考察结果 | 第43-44页 |
| 3.3.4.3 上样量的考察结果 | 第44页 |
| 3.3.4.4 洗脱流速的考察结果 | 第44-45页 |
| 3.3.4.5 洗脱液中乙腈浓度的考察结果 | 第45页 |
| 3.3.4.6 反相硅胶柱层析工艺的验证 | 第45-46页 |
| 3.3.5 多粘菌素两个主要组分的结构确认 | 第46页 |
| 3.3.6 多粘菌素两个组分的抗菌活性考察结果 | 第46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-48页 |
| 4、多粘菌素E高产菌株选育及发酵优化 | 第48-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 出发菌株 | 第48页 |
| 4.1.2 培养基 | 第48页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 4.2.1 培养方法 | 第48-49页 |
| 4.2.2 纯种分离 | 第49页 |
| 4.2.3 室温常压等离子体诱变 | 第49-50页 |
| 4.2.4 NTG诱变 | 第50页 |
| 4.2.5 发酵条件的调控 | 第50-51页 |
| 4.2.5.1 摇瓶种子的生长曲线测定 | 第50页 |
| 4.2.5.2 温度 | 第50页 |
| 4.2.5.3 接种量 | 第50页 |
| 4.2.5.4 初始pH | 第50-51页 |
| 4.2.5.5 摇床转速 | 第51页 |
| 4.2.5.6 装样量 | 第51页 |
| 4.2.5.7 发酵周期 | 第51页 |
| 4.2.6 培养基组分的优化 | 第51-53页 |
| 4.2.6.1 单因素优化实验 | 第51-52页 |
| 4.2.6.2 正交实验的的优化 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-66页 |
| 4.3.1 纯种分离 | 第53页 |
| 4.3.2 室温常压等离子体诱变 | 第53-55页 |
| 4.3.3 NTG诱变 | 第55页 |
| 4.3.4 发酵条件的调控 | 第55-60页 |
| 4.3.4.1 最佳接种时间的选择 | 第55-56页 |
| 4.3.4.2 温度 | 第56页 |
| 4.3.4.3 接种量 | 第56-57页 |
| 4.3.4.4 发酵液的初始pH | 第57-58页 |
| 4.3.4.5 摇床转速 | 第58-59页 |
| 4.3.4.6 装样量 | 第59页 |
| 4.3.4.7 发酵周期 | 第59-60页 |
| 4.3.5 单因素优化实验 | 第60-65页 |
| 4.3.5.1 单一碳源的考察 | 第60-61页 |
| 4.3.5.2 复合碳源的考察 | 第61页 |
| 4.3.5.3 有机氮源的考察 | 第61-62页 |
| 4.3.5.4 无机氮源的考察 | 第62-63页 |
| 4.3.5.5 无机盐的考察 | 第63-64页 |
| 4.3.5.6 微量元素的考察 | 第64页 |
| 4.3.5.7 前体的考察 | 第64-65页 |
| 4.3.6 正交实验的的结果 | 第65-66页 |
| 4.4 本章小结 | 第66-68页 |
| 5、Paenibacillus polymyxa产SIIA1408X的研究 | 第68-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 5.1.1 菌种 | 第68页 |
| 5.1.2 培养基 | 第68页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第68-69页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第69页 |
| 5.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 5.2.1 培养方法 | 第69页 |
| 5.2.2 HPLC分析方法 | 第69页 |
| 5.2.3 初步分离工艺 | 第69-70页 |
| 5.2.3.1 大孔吸附树脂的预处理方法 | 第69页 |
| 5.2.3.2 树脂的筛选 | 第69-70页 |
| 5.2.3.3 动态吸附与解吸条件的筛选 | 第70页 |
| 5.2.4 反相硅胶柱层析 | 第70页 |
| 5.2.5 高压制备液相、结晶 | 第70页 |
| 5.2.6 SIIA1408X的抗菌活性的考察 | 第70页 |
| 5.2.7 发酵培养基的初步优化 | 第70页 |
| 5.2.7.1 NH_4~+浓度的考察 | 第70页 |
| 5.2.7.2 苯丙氨酸添加浓度的考察 | 第70页 |
| 5.2.7.3 苯丙氨酸添加时间的考察 | 第70页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第70-75页 |
| 5.3.1 初步分离工艺的研究结果 | 第70-71页 |
| 5.3.1.1 大孔吸附树脂的筛选 | 第70-71页 |
| 5.3.1.2 动态吸附与解吸条件的优化结果 | 第71页 |
| 5.3.1.3 大孔吸附树脂BEAP-3 吸附与解吸工艺的验证 | 第71页 |
| 5.3.2 反相硅胶柱层析结果 | 第71页 |
| 5.3.3 SIIA-1408-X 的结构确认 | 第71-72页 |
| 5.3.4 苯乳酸的抗菌活性测定结果 | 第72-73页 |
| 5.3.5 发酵培养基的初步优化结果 | 第73-75页 |
| 5.3.5.1 NH_4~+浓度的考察 | 第73-74页 |
| 5.3.5.2 苯丙氨酸添加浓度的考察 | 第74页 |
| 5.3.5.3 苯丙氨酸添加时间的考察 | 第74-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 6、结论与展望 | 第76-78页 |
| 6.1 结论 | 第76页 |
| 6.2 创新点 | 第76页 |
| 6.3 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附件 | 第82-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读硕士期间科研成果 | 第89-90页 |
| 综述 | 第90-103页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
