| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第17-29页 |
| 1.1 脂肪酶简介 | 第17页 |
| 1.2 脂肪酶来源 | 第17-19页 |
| 1.2.1 植物来源 | 第17页 |
| 1.2.2 动物来源 | 第17页 |
| 1.2.3 微生物来源 | 第17-19页 |
| 1.3 脂肪酶结构特性及催化机制 | 第19-21页 |
| 1.4 脂肪酶催化反应类型 | 第21页 |
| 1.4.1 水解反应 | 第21页 |
| 1.4.2 合成反应 | 第21页 |
| 1.5 解脂耶氏酵母脂肪酶简介 | 第21-22页 |
| 1.6 解脂耶氏酵母脂肪酶应用 | 第22-24页 |
| 1.6.1 生物柴油合成 | 第23页 |
| 1.6.2 化学品合成 | 第23页 |
| 1.6.3 药物手性拆分 | 第23-24页 |
| 1.6.4 食品行业 | 第24页 |
| 1.7 脂肪酶重组表达系统 | 第24-26页 |
| 1.7.1 巴斯德毕赤酵母 | 第24-25页 |
| 1.7.2 大肠杆菌 | 第25-26页 |
| 1.8 脂肪酶热稳定性改造 | 第26-27页 |
| 1.9 课题思路及研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 解脂耶氏酵母胞外脂肪酶在毕赤酵母和大肠杆菌中的表达 | 第29-58页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-41页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第29-30页 |
| 2.2.2 酶、常用试剂盒及生化试剂 | 第30页 |
| 2.2.3 培养基 | 第30-31页 |
| 2.2.4 毕赤酵母重组表达载体构建 | 第31-35页 |
| 2.2.5 毕赤酵母感受态制备及电转化 | 第35-36页 |
| 2.2.6 产酶毕赤酵母平板筛选 | 第36-37页 |
| 2.2.7 产酶毕赤酵母摇瓶培养 | 第37页 |
| 2.2.8 大肠杆菌重组表达载体构建及表达 | 第37-38页 |
| 2.2.9 蛋白含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.10 酶活测定 | 第39-40页 |
| 2.2.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第41-57页 |
| 2.3.1 Lip7和Lip8信号肽预测 | 第41-42页 |
| 2.3.2 毕赤酵母重组表达载体构建 | 第42-44页 |
| 2.3.3 重组质粒转化至毕赤酵母 | 第44-47页 |
| 2.3.4 毕赤酵母摇瓶发酵调控 | 第47-52页 |
| 2.3.5 大肠杆菌体系脂肪酶表达 | 第52-57页 |
| 2.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第三章 解脂耶氏酵母胞外脂肪酶性质研究 | 第58-67页 |
| 3.1 引言 | 第58页 |
| 3.2 材料与方法 | 第58-59页 |
| 3.2.1 菌株 | 第58页 |
| 3.2.2 培养基 | 第58页 |
| 3.2.3 产酶毕赤酵母的高密度培养 | 第58-59页 |
| 3.2.4 酶学性质研究 | 第59页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第59-65页 |
| 3.3.1 5L发酵罐体系 | 第59-62页 |
| 3.3.2 pH对酶活力影响 | 第62页 |
| 3.3.3 温度对酶活力影响 | 第62-63页 |
| 3.3.4 金属离子对酶活力影响 | 第63-64页 |
| 3.3.5 底物碳链长度对酶活力影响 | 第64-65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65-67页 |
| 第四章 Lip2的热稳定性改造及氧离子洞位点验证 | 第67-80页 |
| 4.1 引言 | 第67-68页 |
| 4.2 材料与方法 | 第68-72页 |
| 4.2.1 菌株及质粒 | 第68页 |
| 4.2.2 定点突变 | 第68-70页 |
| 4.2.3 毕赤酵母转化及平板筛菌 | 第70页 |
| 4.2.4 突变子摇瓶发酵 | 第70页 |
| 4.2.5 分离纯化 | 第70-71页 |
| 4.2.6 热稳定性突变脂肪酶半衰期测定 | 第71页 |
| 4.2.7 氧离子洞突变脂肪酶酶活测定 | 第71-72页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第72-79页 |
| 4.3.1 突变子表达载体构建 | 第72-73页 |
| 4.3.2 阳性克隆筛选 | 第73页 |
| 4.3.3 热稳定性突变脂肪酶半衰期测定 | 第73-78页 |
| 4.3.4 氧离子洞位点探究 | 第78-79页 |
| 4.4 本章小结 | 第79-80页 |
| 第五章 结论及展望 | 第80-82页 |
| 5.1 主要结论 | 第80-81页 |
| 5.2 创新点 | 第81页 |
| 5.3 展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-87页 |
| 附录 | 第87-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 导师简介 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92-93页 |