| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第19-29页 |
| 1.1 木质素简介 | 第19-21页 |
| 1.1.1 木质素来源 | 第19页 |
| 1.1.2 木质素结构性质 | 第19-21页 |
| 1.2 木质素的生物降解研究进展 | 第21-25页 |
| 1.2.1 真菌降解木质素 | 第21-22页 |
| 1.2.2 木质素降解细菌的研究 | 第22-23页 |
| 1.2.3 Sphingobium sp.SYK-6芳醚(β-O-4键)代谢 | 第23-25页 |
| 1.3 木质素与酶相互作用 | 第25-27页 |
| 1.3.1 木质素与酶相互作用的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.3.2 分子间相互作用检测技术 | 第26-27页 |
| 1.3.2.1 表面等离子体共振(SPR) | 第26-27页 |
| 1.3.2.2 等温滴定量热法(ITC) | 第27页 |
| 1.4 本课题的研究意义 | 第27页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 木质素降解酶LigD、LigF、LigG与AVR的表达及纯化 | 第29-37页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 材料与设备 | 第29-30页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.2.2.1 基因序列的优化和合成 | 第30页 |
| 2.2.2.2 表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 原核表达菌株的转化与诱导 | 第31页 |
| 2.2.2.4 蛋白表达条件优化 | 第31-32页 |
| 2.2.2.5 目的蛋白的纯化及检测 | 第32页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第32-36页 |
| 2.3.1 表达载体的构建、表达菌株的转化与诱导 | 第32-34页 |
| 2.3.2 诱导条件的优化、目的蛋白的纯化及检测 | 第34-36页 |
| 2.4 结论 | 第36-37页 |
| 第三章 木质素样品的制备与表征 | 第37-49页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-38页 |
| 3.2.1 材料与设备 | 第37页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 3.2.2.1 木质素样品膜分离 | 第37-38页 |
| 3.2.2.2 木质素样品的GPC检测 | 第38页 |
| 3.2.2.3 木质素样品中β-醚键有氧氧化 | 第38页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第38-47页 |
| 3.3.1 8K木质素磺酸盐膜分离样品分析 | 第38-42页 |
| 3.3.2 52K木质素磺酸盐与醇提酸沉碱溶木质素膜分离样品分析 | 第42-45页 |
| 3.3.3 木质素样品中β-醚键有氧氧化 | 第45-47页 |
| 3.4 结论 | 第47-49页 |
| 第四章 木质素降解酶LigD、ligF、LigG与AVR酶活性的测定 | 第49-63页 |
| 4.1 引言 | 第49-50页 |
| 4.2 材料与方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 材料与设备 | 第50页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.2.2.1 LigD、LigF、LigG单酶及LigDFG+AVR酶解体系体外反应条件 | 第50-51页 |
| 4.2.2.2 酶解产物的薄层层析检测 | 第51页 |
| 4.2.2.3 酶解产物的高效液相色谱检测 | 第51页 |
| 4.2.2.4 天然木质素样品酶解前后的电喷雾质谱ESI-MS分析 | 第51页 |
| 4.2.2.5 比色法 | 第51-52页 |
| 4.2.2.6 荧光测定法 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第53-61页 |
| 4.3.1 LigD、LigF、LigG单酶及LigDFG+AVR酶解体系的酶解活性 | 第53-55页 |
| 4.3.2 天然木质素样品的酶解 | 第55-57页 |
| 4.3.3 微量比色法测定结果 | 第57-59页 |
| 4.3.4 荧光测定法测定结果 | 第59-61页 |
| 4.4 结论 | 第61-63页 |
| 第五章 木质素降解酶LigD、LigF与木质素相互作用的研究 | 第63-79页 |
| 5.1 引言 | 第63页 |
| 5.2 材料与方法 | 第63-64页 |
| 5.2.1 材料与设备 | 第63页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第63-64页 |
| 5.2.2.1 等温滴定量热法 | 第63-64页 |
| 5.2.2.2 表面等离子体共振 | 第64页 |
| 5.2.2.3 LigD、LigF体外酶解反应设计 | 第64页 |
| 5.2.2.4 分子模拟与模拟吸附对接 | 第64页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第64-77页 |
| 5.3.1 SL对LigD、LigF对模型化合物酶解效率的影响 | 第64-65页 |
| 5.3.2 LigD、LigF与lignosulfonate相互作用的确定 | 第65-69页 |
| 5.3.3 木质素磺酸盐质量与分子量对LigD、LigF酶解效率的影响 | 第69-70页 |
| 5.3.4 酶解体系的离子强度对酶-SL吸附的影响 | 第70-72页 |
| 5.3.5 酶解体系的温度及表面活性剂对酶-SL吸附的影响 | 第72-74页 |
| 5.3.6 LigD、LigF与SL分子模拟及模拟吸附对接 | 第74-77页 |
| 5.4 结论 | 第77-79页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第79-81页 |
| 6.1 全文结论 | 第79-80页 |
| 6.1.1 木质素降解酶LigD、LigF、LigG与AVR的诱导表达及纯化 | 第79页 |
| 6.1.2 纯化木质素降解酶LigD、LigF、LigG与AVR体外活性实验 | 第79页 |
| 6.1.3 木质素降解酶LigD、LigF与木质素相互作用的研究 | 第79页 |
| 6.1.4 快速、高通量检测LigF酶解反应方法的建立 | 第79-80页 |
| 6.2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 附录 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第93-95页 |
| 导师简介 | 第95-97页 |
| 作者简介 | 第97-98页 |
| 附件 | 第98-99页 |
