| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第16-24页 |
| 1.1 食管癌概述 | 第16-18页 |
| 1.1.1 食管癌的分类 | 第16页 |
| 1.1.2 食管癌的病因 | 第16-17页 |
| 1.1.3 食管癌的分布 | 第17页 |
| 1.1.4 食管癌的诊断和治疗 | 第17-18页 |
| 1.2 miRNA的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.1 miRNA的生成 | 第18页 |
| 1.2.2 miRNA的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 miRNA的发展史 | 第19页 |
| 1.2.4 miRNA与癌症的关系 | 第19-20页 |
| 1.2.5 miRNA与食管癌的关系 | 第20页 |
| 1.2.6 miR-150和miR-383与癌症的关系 | 第20-21页 |
| 1.3 5SrRNA概述 | 第21-22页 |
| 1.3.1 5SrRNA的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4 立题背景和研究意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验部分 | 第24-44页 |
| 2.1 细胞培养 | 第24-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 实验步骤 | 第24-26页 |
| 2.1.2.1 培养基的选择 | 第24页 |
| 2.1.2.2 细胞复苏 | 第24-25页 |
| 2.1.2.3 细胞换液 | 第25页 |
| 2.1.2.4 细胞传代 | 第25-26页 |
| 2.1.2.5 细胞冻存 | 第26页 |
| 2.2 细胞转染 | 第26-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.2.2 实验步骤 | 第26-27页 |
| 2.3 总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.3.2 实验步骤 | 第27-28页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR | 第28-30页 |
| 2.4.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.4.2 实验步骤 | 第29-30页 |
| 2.4.2.1 RT-PCR | 第29页 |
| 2.4.2.2 实时荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 2.4.3 数据处理 | 第30页 |
| 2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第30-32页 |
| 2.5.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.5.2 实验步骤 | 第31页 |
| 2.5.3 5×TBE缓冲液的配制 | 第31-32页 |
| 2.6 双荧光素酶报告基因实验 | 第32-35页 |
| 2.6.1 质粒的构建 | 第32-34页 |
| 2.6.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.6.1.2 实验步骤 | 第32-34页 |
| 2.6.2 双荧光素酶报告基因实验 | 第34-35页 |
| 2.6.2.1 实验材料 | 第34页 |
| 2.6.2.2 实验步骤 | 第34-35页 |
| 2.7 蛋白印迹法 | 第35-40页 |
| 2.7.1 实验所用主要试剂、耗材和仪器 | 第35-36页 |
| 2.7.2 实验步骤 | 第36-40页 |
| 2.8 文章所用主要实验仪器 | 第40-41页 |
| 2.9 文章所用主要实验试剂 | 第41-42页 |
| 2.10 文章相关溶液配制 | 第42页 |
| 2.11 数据处理分析 | 第42-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-54页 |
| 3.1 miR-150和miR-383对5SrRNA有转录后的调控 | 第44-45页 |
| 3.1.1 生物信息学方法预测5SrRNA是miR-150和miR-383的一个靶标 | 第44页 |
| 3.1.2 在食管鳞癌细胞系中过表达miR-150和miR-383下调5SrRNA的表达 | 第44-45页 |
| 3.2 过表达miR-150和miR-383直接抑制5SrRNA的转录活性 | 第45-48页 |
| 3.2.1 构建成功的质粒 | 第46页 |
| 3.2.2 在KYSE30和KYSE510中过表达miR-150和miR-383直接调控5SrRNA | 第46-48页 |
| 3.3 过表达miR-150和miR-383抑制食管鳞癌细胞增殖通过下调5SrRNA的表达 | 第48-50页 |
| 3.4 过表达miR-150和miR-383诱导p21的表达以非依赖p53的途径 | 第50-52页 |
| 3.4.1 不同食管癌细胞系中内源性Mdmx的表达 | 第51页 |
| 3.4.2 过表达miR-150和miR-383对相关蛋白的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 作用机制图 | 第52-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
| 研究成果和学术论文 | 第64-66页 |
| 作者和导师简介 | 第66-67页 |
| 附件 | 第67-68页 |
