摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
第一章 绪论 | 第9-17页 |
1.1 L-瓜氨酸及其生产方法 | 第9-12页 |
1.1.1 L-瓜氨酸的结构及其性质 | 第9页 |
1.1.2 L-瓜氨酸功能及应用 | 第9-10页 |
1.1.3 L-瓜氨酸的生产方法 | 第10-12页 |
1.2 精氨酸脱亚胺酶的研究概况 | 第12-14页 |
1.2.1 精氨酸脱亚胺酶性质研究 | 第12-14页 |
1.2.2 精氨酸脱亚胺酶的功能及应用 | 第14页 |
1.3 精氨酸脱亚胺酶生产的国内外研究进展 | 第14-15页 |
1.3.1 精氨酸脱亚胺酶生产的国外研究进展 | 第14-15页 |
1.3.2 精氨酸脱亚胺酶生产的国内研究进展 | 第15页 |
1.4 论文研究内容 | 第15-17页 |
1.4.1 论文立题背景和研究意义 | 第15-16页 |
1.4.2 论文研究内容 | 第16-17页 |
第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
2.1 实验材料 | 第17-20页 |
2.1.1 菌种和质粒 | 第17页 |
2.1.2 引物设计 | 第17页 |
2.1.3 主要实验仪器 | 第17-18页 |
2.1.4 培养基与培养条件 | 第18-19页 |
2.1.5 主要实验试剂 | 第19页 |
2.1.6 相关试剂的配制 | 第19-20页 |
2.2 实验方法 | 第20-26页 |
2.2.1 E. fecalis基因组的提取 | 第20页 |
2.2.2 目的基因的克隆 | 第20页 |
2.2.3 重组表达载体和重组菌的构建 | 第20页 |
2.2.4 感受态细胞的制备和转化方法 | 第20-21页 |
2.2.5 重组菌精氨酸脱亚胺酶的表达 | 第21页 |
2.2.6 精氨酸脱亚胺酶的酶活分析 | 第21页 |
2.2.7 精氨酸脱亚胺酶的纯化及酶学性质分析 | 第21-22页 |
2.2.8 重组菌转化L-瓜氨酸的验证 | 第22-23页 |
2.2.9 全细胞转化法生产L-瓜氨酸的条件优化 | 第23-24页 |
2.2.10 5-L发酵罐全细胞多批次转化生产L-瓜氨酸 | 第24-25页 |
2.2.11 氨基酸分析方法 | 第25-26页 |
第三章 结果和讨论 | 第26-40页 |
3.1 C. crenatum SYPA 5-5/pXMJ19-arcA的构建及其功能验证 | 第26-29页 |
3.1.1 E. faecalis精氨酸脱亚胺酶基因arcA的克隆及序列分析 | 第26页 |
3.1.2 重组质粒pXMJ19-arcA的构建与转化 | 第26-28页 |
3.1.3 arcA在C. crenatum SYPA 5-5中的表达及酶活分析 | 第28-29页 |
3.2 精氨酸脱亚胺酶的纯化以及酶学性质研究 | 第29-32页 |
3.2.1 精氨酸脱亚胺酶的纯化 | 第29页 |
3.2.2 精氨酸脱亚胺酶的最适pH和pH稳定性 | 第29-30页 |
3.2.3 精氨酸脱亚胺酶的温度稳定性和温度稳定性 | 第30-31页 |
3.2.4 金属离子和EDTA对精氨酸脱亚胺酶活的影响 | 第31页 |
3.2.5 精氨酸脱亚胺酶的反应动力学常数测定 | 第31-32页 |
3.3 重组菌全细胞转化L-精氨酸生产L-瓜氨酸 | 第32-37页 |
3.3.1 重组菌C. crenatum SYPA 5-5/pXMJ19-arcA转化L-瓜氨酸的初步验证 | 第32-34页 |
3.3.2 转化温度的优化 | 第34页 |
3.3.3 初始转化pH的优化 | 第34-35页 |
3.3.4 底物L-精氨酸添加浓度的优化 | 第35-36页 |
3.3.5 转化缓冲液浓度的优化 | 第36-37页 |
3.3.6 重组菌C. crenatum SYPA 5-5/pXMJ19-arcA全细胞转化生产L-瓜氨酸 | 第37页 |
3.4 重组菌5-L发酵罐全细胞转化L-精氨酸生产L-瓜氨酸条件优化 | 第37-40页 |
3.4.1 初始诱导时间的优化 | 第37页 |
3.4.2 诱导时长的优化 | 第37-38页 |
3.4.3 5-L发酵罐全细胞多批次转化底物L-精氨酸生产L-瓜氨酸 | 第38-40页 |
主要结论和展望 | 第40-42页 |
主要结论 | 第40页 |
展望 | 第40-42页 |
致谢 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-47页 |
附录:作者在攻读硕士学位论文期间发表的论文 | 第47页 |