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基于GmFT2a和AtD-CGS基因组成型表达的开花期调控与大豆蛋白品质改良

摘要第6-8页
abstract第8-9页
英文缩略表第15-17页
第一章 文献综述第17-34页
    引言第17页
    1.1 GmFT2a与大豆开花期和生育期调控第17-27页
        1.1.1 大豆生育期组划分第18-19页
        1.1.2 大豆生育期基因第19页
        1.1.3 开花刺激物与开花素第19-20页
        1.1.4 植物开花的基因水平研究第20页
        1.1.5 多途径调控的植物开花诱导第20-27页
    1.2 AtD-CGS基因与大豆的蛋白品质改良第27-34页
        1.2.1 植物含硫氨基酸代谢及调控第28页
        1.2.2 赖氨酸的合成及调控第28-29页
        1.2.3 半胱氨酸的合成代谢及调控第29-30页
        1.2.4 蛋氨酸合成及代谢第30-32页
        1.2.5 植物蛋氨酸品质改良第32-34页
第二章 转GmFT2a基因大豆早花表型及开花相关基因的表达分析第34-44页
    2.1 材料与方法第34-38页
        2.1.1 实验材料第34页
        2.1.2 大豆遗传转化方法第34-36页
        2.1.3 转基因材料的种植和筛选第36-37页
        2.1.4 GmFT2a及开花相关基因在大豆叶片中的表达分析第37-38页
    2.2 结果与分析第38-41页
        2.2.1 转基因大豆的获得及后代的早花表型鉴定第38-39页
        2.2.2 转基因后代GmFT2a的表达与其他开花相关基因的表达检测第39-41页
    2.3 讨论第41-44页
第三章 GmFT2a基因表达量与转基因大豆的开花时间第44-60页
    3.1 材料与方法第44-50页
        3.1.1 植物材料第44页
        3.1.2 材料种植与光照处理第44页
        3.1.3 叶片取样第44页
        3.1.4 大豆叶片总RNA的提取及cDNA第一链合成第44-45页
        3.1.5 定量PCR检测GmFT2a在转基因株系中的表达量第45-46页
        3.1.6 转基因大豆外源插入拷贝数检测第46-48页
        3.1.7 甲基化区域预测和检测第48-50页
    3.2 结果与分析第50-58页
        3.2.1 不同光照条件下的转基因早花大豆第50-52页
        3.2.2 基因表达水平与早花表型的关联第52-53页
        3.2.3 转基因早花材料间的生育差异和农艺性状差异第53-54页
        3.2.4 转基因世代间表型遗传的不稳定性第54-55页
        3.2.5 启动子甲基化与开花时间的分化第55-58页
    3.3 讨论第58-60页
        3.3.1 不同早花类型后代产生的原因第58页
        3.3.2 GmFT2a对大豆开花调控的剂量效应第58-59页
        3.3.3 早花表型不稳定性与目的基因的多拷贝甲基化沉默第59页
        3.3.4 基于大面积种植品种的大豆广适性分子育种策略第59-60页
第四章 转GmFT2a基因大豆转录组分析及基因表达抑制第60-70页
    4.1 材料与方法第60-62页
        4.1.1 材料种植与取样第60页
        4.1.2 总RNA提取及转录组测序第60页
        4.1.3 转录组分析第60-61页
        4.1.4 RNA提取及基因表达检测第61-62页
    4.2 结果与分析第62-68页
        4.2.1 测序结果比对Mapping rate统计第62页
        4.2.2 样品间GO注释分析结果第62-64页
        4.2.3 差异基因的聚类分析和样品相关性分析结果第64-66页
        4.2.4 光周期调控通路中的相关基因筛选第66页
        4.2.5 转基因早花材料及野生型材料GmFT2a早期的转录水平第66-67页
        4.2.6 转基因材料中GmFT2a的表达变化第67-68页
    4.3 讨论第68-70页
        4.3.1 转录组测序与DEGs基因的筛选第68页
        4.3.2 转录后抑制与大豆开花调控第68-70页
第五章 GmCGS基因及在大豆中的反馈抑制效应第70-77页
    5.1 材料与方法第70-72页
        5.1.1 AtD-CGS基因进化分析第70页
        5.1.2 大豆内源CGS基因反馈抑制效应的检测第70-72页
    5.2 结果与分析第72-76页
        5.2.1 CGS基因相关生物信息学分析第72-75页
        5.2.2 大豆内源CGS基因反馈抑制效应的检测第75-76页
    5.3 讨论第76-77页
        5.3.1 CGS基因的保守结构域第76页
        5.3.2 GmCGS存在显著的反馈抑制效应第76-77页
第六章 AtD-CGS转基因大豆的基因组整合及表达鉴定第77-88页
    6.1 材料与方法第77-83页
        6.1.1 转基因后代材料种植筛选第77页
        6.1.2 DNA提取与PCR鉴定第77-78页
        6.1.3 Southern Blot与基因组整合鉴定第78-80页
        6.1.4 RNA提取与转录水平检测第80-81页
        6.1.5 蛋白表达水平鉴定与表达特异性第81-83页
    6.2 结果与分析第83-87页
        6.2.1 过表达AtD-CGS转基因大豆的除草剂筛选及基因组整合鉴定第83-86页
        6.2.2 转基因材料的转录水平鉴定第86页
        6.2.3 转基因后代蛋白表达水平的鉴定结果第86-87页
    6.3 讨论第87-88页
        6.3.1 转基因后代的异常表型第87页
        6.3.2 AtD-CGS转基因后代的表达模式第87-88页
第七章 AtD-CGS转基因后代株系的品质鉴定第88-104页
    7.1 材料与方法第88-93页
        7.1.1 转基因大豆品系第88页
        7.1.2 气质联用与大豆蛋氨酸含量测定第88-90页
        7.1.3 籽粒中蛋白和脂肪含量的测定第90-91页
        7.1.4 大豆蛋白表达谱的分析鉴定第91-93页
    7.2 结果与分析第93-100页
        7.2.1 大豆叶片中游离态及总氨基酸含量第93-94页
        7.2.2 大豆籽粒中游离态及总氨基酸含量第94-98页
        7.2.3 大豆籽粒蛋白和脂肪含量第98-99页
        7.2.4 转基因大豆籽粒储藏蛋白表达谱的初步分析第99-100页
    7.3 讨论第100-104页
        7.3.1 AtD-CGS转基因大豆蛋氨酸含量的提高第100-101页
        7.3.2 高蛋氨酸促进籽粒蛋白的积累第101-102页
        7.3.3 大豆品质改良与分子设计策略第102-104页
全文结论第104-105页
参考文献第105-113页
致谢第113-114页
作者简历第114-115页

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