| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 体细胞克隆的研究进展 | 第13页 |
| 1.2 体细胞克隆中供体细胞的类型 | 第13页 |
| 1.3 不同类型供体细胞对体细胞克隆的影响 | 第13-14页 |
| 1.4 表观遗传对体细胞克隆的影响 | 第14-16页 |
| 1.4.1 表观遗传修饰对克隆胚发育影响的研究 | 第14-15页 |
| 1.4.2 表观遗传修饰中DNA甲基化和组蛋白乙酰化 | 第15-16页 |
| 1.5 其他因素对体细胞克隆的影响 | 第16页 |
| 1.6 体细胞克隆的应用及存在问题 | 第16-17页 |
| 1.6.1 体细胞克隆的应用 | 第16-17页 |
| 1.6.2 体细胞克隆中存在的问题 | 第17页 |
| 1.7 Sox2基因的研究 | 第17-19页 |
| 1.7.1 Sox2基因的功能 | 第17-18页 |
| 1.7.2 Sox2在胚胎发育中的作用 | 第18页 |
| 1.7.3 Sox2对体细胞克隆的影响 | 第18页 |
| 1.7.4 Sox2基因在肿瘤方面的研究 | 第18-19页 |
| 1.8 本研究的目的和主要研究内容 | 第19-20页 |
| 1.8.1 研究目的、意义 | 第19页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 2 实验一 绵羊骨髓间充质干细胞(BMSCS)、脂肪间充质干细胞(ADSCS)、和皮肤成纤维细胞(SEFCS)系的建立 | 第20-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 生物试验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.1.4 试验仪器及耗材 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 绵羊BMSCs全骨髓法培养 | 第21页 |
| 2.2.2 绵羊ADSCs酶消化法培养 | 第21-22页 |
| 2.2.3 绵羊SEFCs的组织块贴壁法培养 | 第22页 |
| 2.2.4 传代培养与纯化 | 第22页 |
| 2.2.5 细胞冻存 | 第22页 |
| 2.2.6 P3细胞生长曲线的制作 | 第22-23页 |
| 2.2.7 BMSCs和ADSCs的干细胞转录因子的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.3 结果分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 绵羊BMSCs、ADSCs和SEFCs生物学特性分析 | 第25-28页 |
| 2.3.2 BMSCs和ADSCs干细胞转录因子的检测 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 3 实验二 SOX2基因转染ADSCS、BMSCS和SEFCS及其表观遗传分析 | 第31-43页 |
| 3.1 试验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 试验试剂 | 第31页 |
| 3.1.2 试剂配制 | 第31页 |
| 3.1.3 试验仪器及耗材 | 第31-32页 |
| 3.2 试验方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 质粒扩增 | 第32页 |
| 3.2.2 ADSCs,BMSCs和SEFCs的电转染 | 第32-33页 |
| 3.2.3 单克隆细胞的G418筛选以及扩繁 | 第33页 |
| 3.2.4 单克隆细胞HDAC2和DNMT1的表达 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-42页 |
| 3.3.1 质粒扩增 | 第34页 |
| 3.3.2 ADSCs、BMSCs和SEFCs的电转染 | 第34-36页 |
| 3.3.3 细胞毒性筛选 | 第36-37页 |
| 3.3.4 单克隆的扩繁及Sox2基因的表达 | 第37-38页 |
| 3.3.5 克隆细胞HDAC2和DNMT1的表达 | 第38-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43页 |
| 4 实验三 克隆胚构建及其DNMT1和HDAC2基因的表达 | 第43-55页 |
| 4.1 试验材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 生物材料 | 第43页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 试验设备 | 第43-44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-48页 |
| 4.2.1 卵母细胞体外成熟 | 第44-45页 |
| 4.2.2 克隆胚的构建以及体外发育 | 第45-46页 |
| 4.2.3 克隆胚DNMT1和HDAC2基因的表达 | 第46-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-53页 |
| 4.3.1 卵母细胞的体外发育 | 第48-49页 |
| 4.3.2 克隆胚胎发育 | 第49-50页 |
| 4.3.3 克隆胚中HDAC2和DNMT1表达 | 第50-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 4.5 小结 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录 | 第65-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
