| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 英文缩略语 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-20页 |
| 本文主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第一部分 重组慢病毒介导的MCM7基因沉默对白血病K562细胞生物学效应的影响 | 第21-94页 |
| 前言 | 第21-24页 |
| 第一章 RNAi慢病毒载体的设计与构建 | 第24-56页 |
| 1.1 材料 | 第25-29页 |
| 1.2 shRNA靶点设计与构建 | 第29-39页 |
| 1.3 感受态制备 | 第39-40页 |
| 1.4 转化过程 | 第40-41页 |
| 1.5 阳性克隆PCR鉴定 | 第41-46页 |
| 1.6 RNAi慢病毒包装 | 第46-50页 |
| 1.7 Lentivirus滴度测定 | 第50-53页 |
| 1.8 讨论 | 第53-56页 |
| 第二章 RNAi介导的MCM7基因沉默在白血病K562细胞中的作用及其机制 | 第56-94页 |
| 2.1 材料 | 第57-63页 |
| 2.2 实验方法 | 第63-78页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第63页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第63页 |
| 2.2.3 Lentivirus的储存与稀释 | 第63-64页 |
| 2.2.4 K562细胞稳转株的建立 | 第64-72页 |
| 2.2.5 实验分组 | 第72-73页 |
| 2.2.6 CCK-8测定各组的细胞增殖情况 | 第73-74页 |
| 2.2.7 FCM检测细胞周期 | 第74-75页 |
| 2.2.8 FCM检测细胞凋亡 | 第75页 |
| 2.2.9 Western Blot检测各组细胞MCM7基因的表达 | 第75页 |
| 2.2.10 不同白血病K562稳转株细胞荷瘤裸鼠模型的建立 | 第75-76页 |
| 2.2.11 处理期裸鼠生理状况观察 | 第76页 |
| 2.2.12 Western Blot检测各组肿瘤组织中MCM7基因的表达 | 第76-77页 |
| 2.2.13 免疫组织化学染色 | 第77-78页 |
| 2.3 统计学方法 | 第78页 |
| 2.4 实验结果 | 第78-90页 |
| 2.4.1 荧光显微镜观察慢病毒感染细胞的效率 | 第78-79页 |
| 2.4.2 特异性干扰MCM7基因后MCM7 mRNA表达的变化 | 第79-80页 |
| 2.4.3 特异性干扰MCM7基因后MCM7蛋白表达的变化 | 第80-82页 |
| 2.4.4 细胞增殖活性判定 | 第82页 |
| 2.4.5 流式细胞术检测细胞周期 | 第82-83页 |
| 2.4.6 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第83-84页 |
| 2.4.7 Western blot检测MCM7蛋白及相关蛋白表达 | 第84-86页 |
| 2.4.8 白血病K562细胞荷瘤裸鼠的建模 | 第86页 |
| 2.4.9 处理期裸鼠生理状况观察 | 第86-88页 |
| 2.4.10 Western blot检测肿瘤组织中MCM7蛋白及相关蛋白表达 | 第88-89页 |
| 2.4.11 免疫组织化学染色结果 | 第89-90页 |
| 2.5 结论 | 第90页 |
| 2.6 讨论 | 第90-94页 |
| 第二部分 重组慢病毒介导的MCM7基因沉默对肝癌MHCC-97H细胞生物学效应的影响 | 第94-108页 |
| 前言 | 第94-95页 |
| 1 材料 | 第95页 |
| 2 方法 | 第95-98页 |
| 2.1 细胞的培养与准备 | 第95-96页 |
| 2.2 分组 | 第96页 |
| 2.3 MTT法分析细胞增殖 | 第96页 |
| 2.4 FCM检测细胞周期 | 第96页 |
| 2.5 FCM检测细胞凋亡 | 第96-97页 |
| 2.6 体外迁移能力测定 | 第97页 |
| 2.7 体外侵袭能力测定 | 第97-98页 |
| 3 统计学分析 | 第98页 |
| 4 结果 | 第98-105页 |
| 4.1 荧光显微镜观察慢病毒感染细胞的效率 | 第98-99页 |
| 4.2 特异性干扰MCM7基因后MCM7 mRNA表达的变化 | 第99-100页 |
| 4.3 特异性干扰MCM7基因后MCM7蛋白表达的变化 | 第100-102页 |
| 4.4 细胞增殖活性判定 | 第102页 |
| 4.5 流式细胞术检测细胞周期 | 第102-103页 |
| 4.6 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第103-104页 |
| 4.7 体外迁移能力测定 | 第104页 |
| 4.8 体外侵袭能力测定 | 第104-105页 |
| 5 结论 | 第105页 |
| 6 讨论 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-123页 |
| 个人简介 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
