| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| 1.1 抗菌肽的起源以及现状 | 第8-9页 |
| 1.2 抗菌肽活性域的结构 | 第9页 |
| 1.3 抗菌肽的分类 | 第9-12页 |
| 1.3.1 按抗菌谱分类 | 第9-11页 |
| 1.3.2 按结构分类 | 第11-12页 |
| 1.3.3 按来源分类 | 第12页 |
| 1.4 抗菌肽的作用机理 | 第12-13页 |
| 1.5 抗菌肽的应用前景 | 第13-14页 |
| 1.5.1 药用前景 | 第13-14页 |
| 1.5.2 抗菌肽作为饲料添加剂的研究应用 | 第14页 |
| 1.6 抗菌肽的基因工程表达策略 | 第14-16页 |
| 1.6.1 抗菌肽的基因工程研究现状 | 第14页 |
| 1.6.2 抗菌肽的原核表达系统 | 第14-15页 |
| 1.6.3 抗菌肽的酵母表达系统 | 第15-16页 |
| 1.7 来源于太平洋牡蛎的抗菌肽cgMolluscidin的简介 | 第16页 |
| 1.8 鳄梨源的防御素PaDef简介 | 第16页 |
| 1.9 本课题的研究目的及意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-35页 |
| 2.1 材料 | 第18-24页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 试验所用仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要培养基的配置 | 第20-21页 |
| 2.1.5 标准储存液的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.6 Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳试剂 | 第22页 |
| 2.1.7 SDS-PAGE蛋白电泳试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.8 Ni柱亲和层析缓冲液 | 第23页 |
| 2.1.9 GST标签的亲和层析缓冲液 | 第23页 |
| 2.1.10 银染试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 抗菌肽cgMolluscidin在大肠杆菌中的表达、纯化以及活性鉴定 | 第24-29页 |
| 2.2.2 抗菌肽PaDef在毕赤酵母中的表达、纯化及抑菌活性 | 第29-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-49页 |
| 3.1 大肠杆菌表达抗菌肽cgMolluscidin | 第35-41页 |
| 3.1.1 表达载体的构建和目的基因cgMolluscidin的获得 | 第35-36页 |
| 3.1.2 大肠杆菌重组表达载体pET28a-cg和pGEX-cg的双切验证 | 第36页 |
| 3.1.3 大肠杆菌融合表达载体pET28a-cg和pGEX-cg的测序结果图 | 第36-38页 |
| 3.1.4 重组抗菌肽His-cgMolluscidin和GST-cgMolluscidin的纯化 | 第38页 |
| 3 1.5 融合蛋白His-cgMolluscidin和GST-cgMolluscidin的亲和纯化 | 第38-39页 |
| 3.1.6 肠激酶切割融合蛋白 | 第39-40页 |
| 3.1.7 抑菌圈试验 | 第40-41页 |
| 3.2 目的基因PaDef在毕赤酵母中的表达 | 第41-49页 |
| 3.2.1 载体的构建和目的基因的获得 | 第41-42页 |
| 3.2.2 毕赤酵母重组表达载体pPICZαA-PaDef的双酶切验证 | 第42页 |
| 3.2.3 毕赤酵母重组表达载体的测序结果 | 第42-43页 |
| 3.2.4 重组抗菌肽质粒的线性化 | 第43页 |
| 3.2.5 酵母转化子的PCR筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.6 PaDef基因在毕赤酵母中的表达情况 | 第44-45页 |
| 3.2.7 用抑菌圈试验初步筛选有抗菌活性的转化子 | 第45页 |
| 3.2.8 抑菌效果试验 | 第45-46页 |
| 3.2.9 甲醇诱导浓度的优化 | 第46-47页 |
| 3.2.10 Ni柱亲和纯化 | 第47页 |
| 3.2.11 最小抑菌浓度的MIC试验 | 第47-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 5 展望 | 第50-51页 |
| 6 参考文献 | 第51-60页 |
| 7 致谢 | 第60页 |
