| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-29页 |
| 第一章 植物冷胁迫响应调控机制及基因启动子调控的研究进展 | 第17-29页 |
| 1 CBF转录因子参与植物冷响应的机制 | 第17-25页 |
| 1.1 冷信号转导 | 第17-18页 |
| 1.2 CBF信号通路 | 第18-20页 |
| 1.2.1 ICEI-CBF转录级联 | 第18-19页 |
| 1.2.2 CBF的负调控因子 | 第19-20页 |
| 1.3 翻译后修饰调节 | 第20-23页 |
| 1.3.1 RNA加工和从核内输出 | 第20-21页 |
| 1.3.2 小RNA调控 | 第21-23页 |
| 1.3.3 翻译后修饰调节 | 第23页 |
| 1.4 CBF联结多种响应反应 | 第23-25页 |
| 1.4.1 冷响应与生物钟 | 第23-24页 |
| 1.4.2 冷响应与开花 | 第24-25页 |
| 2 基因启动子调控的研究技术进展 | 第25-29页 |
| 2.1 基因的启动子及结构 | 第25页 |
| 2.2 启动子的分类 | 第25-28页 |
| 2.2.1 组成型启动子 | 第25-26页 |
| 2.2.2 组织特异型启动子 | 第26页 |
| 2.2.3 诱导型启动子 | 第26-28页 |
| 2.3 启动子分析 | 第28-29页 |
| 第二部分 研究报告 | 第29-123页 |
| 第二章 不结球白菜CBF基因家族的分离鉴定及冷响应模式分析 | 第29-49页 |
| 引言 | 第30-31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-38页 |
| 1.1 材料 | 第31-32页 |
| 1.1.1 植物材料及处理 | 第31-32页 |
| 1.1.2 酶和引物 | 第32页 |
| 1.1.3 载体和菌株 | 第32页 |
| 1.1.4 试剂盒 | 第32页 |
| 1.1.5 培养基及预配试剂 | 第32页 |
| 1.2 方法 | 第32-38页 |
| 1.2.1 总RNA提取 | 第32-33页 |
| 1.2.2 反转录及第一链cDNA合成 | 第33页 |
| 1.2.3 不结球白菜CBF基因的克隆 | 第33-35页 |
| 1.2.4 PCR产物的得到 | 第35页 |
| 1.2.5 目的片段连入测序载体 | 第35页 |
| 1.2.6 大肠杆菌转化 | 第35-36页 |
| 1.2.7 菌液PCR及测序 | 第36页 |
| 1.2.8 质粒提取及检测 | 第36页 |
| 1.2.9 不结球白菜CBF蛋白序列分析 | 第36-37页 |
| 1.2.10 系统发育分析 | 第37页 |
| 1.2.11 BcCBF基因的定量分析 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-46页 |
| 2.1 不结球白菜CBF基因的克隆和序列分析 | 第38-42页 |
| 2.2 不结球白菜的系统发育分析 | 第42-43页 |
| 2.3 不结球白菜CBF基因的冷响应模式分析 | 第43-44页 |
| 2.4 不结球白菜CBF基因的干旱及激素响应分析 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 不结球白菜CBF蛋白的亚细胞定位及BcCBF3的转基因分析 | 第49-63页 |
| 引言 | 第50-51页 |
| 1 材料与方法 | 第51-57页 |
| 1.1 材料 | 第51页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 1.1.2 菌株和试剂 | 第51页 |
| 1.1.3 常用储液 | 第51页 |
| 1.2 试验方法 | 第51-57页 |
| 1.2.1 Gateway技术构建植物过量表达载体 | 第51-53页 |
| 1.2.2 BcCBF3的VIGS载体构建 | 第53-54页 |
| 1.2.3 农杆菌电击感受态的制备 | 第54-55页 |
| 1.2.4 载体转化农杆菌 | 第55页 |
| 1.2.5 亚细胞定位 | 第55页 |
| 1.2.6 BcCBF3过量表达农杆菌转化拟南芥及筛选 | 第55-56页 |
| 1.2.7 BcCBF3抑制表达农杆菌转化不结球白菜 | 第56页 |
| 1.2.8 转基因植株的检测 | 第56-57页 |
| 1.2.9 转基因植株的耐寒分析 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-62页 |
| 2.1 重组质粒的构建及农杆菌的转化 | 第57-58页 |
| 2.2 BcCBF蛋白的亚细胞定位 | 第58-59页 |
| 2.3 过量表达转基因拟南芥的鉴定 | 第59-60页 |
| 2.4 VIGS瞬时表达转基因不结球白菜的鉴定 | 第60页 |
| 2.5 转基因植株的表达分析 | 第60-62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| 第四章 不结球白菜BcCBF3启动子及上游调控BcWRKY33功能的研究 | 第63-81页 |
| 引言 | 第64-65页 |
| 1 材料与方法 | 第65-72页 |
| 1.1 试验材料 | 第65-66页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第65页 |
| 1.1.2 菌株和载体 | 第65页 |
| 1.1.3 酶、试剂盒和引物 | 第65-66页 |
| 1.1.4 自配储液 | 第66页 |
| 1.2 试验方法 | 第66-72页 |
| 1.2.1 BcCBF3的启动子分析 | 第66-67页 |
| 1.2.2 启动子的克隆和载体构建 | 第67-68页 |
| 1.2.3 烟草的转化 | 第68-69页 |
| 1.2.4 GUS染色分析 | 第69页 |
| 1.2.5 BcWRKY33的载体构建 | 第69-70页 |
| 1.2.6 BcWRKY33的原核表达 | 第70-71页 |
| 1.2.7 BcWRKY33过量表达载体转化不结球白菜 | 第71-72页 |
| 1.2.8 表达特性分析 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-79页 |
| 2.1 BcCBF3启动子分析及顺式元件预测 | 第72-74页 |
| 2.2 BcCBF3启动子的克隆及载体构建 | 第74页 |
| 2.3 BcCBF3启动子在不结球白菜中的表达分析 | 第74-75页 |
| 2.4 BcCBF3启动子在烟草中的表达分析 | 第75-76页 |
| 2.5 BcWRKY33的原核表达 | 第76页 |
| 2.6 BcWRKY33过表达载体转化不结球白菜及鉴定 | 第76-78页 |
| 2.7 转基因植株的表达分析 | 第78-79页 |
| 3 讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 不结球白菜芜菁花叶病毒响应miRNA参与CBF冷信号通路的研究 | 第81-103页 |
| 引言 | 第82-83页 |
| 1 材料与方法 | 第83-87页 |
| 1.1 材料 | 第83-84页 |
| 1.1.1 植物材料及处理 | 第83页 |
| 1.1.2 数据库及软件 | 第83-84页 |
| 1.2 方法 | 第84-87页 |
| 1.2.1 小分子RNA文库的构建及Solexa测序 | 第84-85页 |
| 1.2.2 保守及新miRNA的鉴定 | 第85页 |
| 1.2.3 差异表达miRNA的分析鉴定 | 第85页 |
| 1.2.4 靶基因预测及功能注释 | 第85-86页 |
| 1.2.5 实时定量分析 | 第86-87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-100页 |
| 2.1 Solexa测序结果 | 第87-95页 |
| 2.2 保守miRNA鉴定 | 第95页 |
| 2.3 新miRNA的鉴定 | 第95-96页 |
| 2.4 差异表达miRNA的鉴定 | 第96-98页 |
| 2.5 靶基因预测及功能分析 | 第98-99页 |
| 2.6 miRNA及其靶基因的表达分析 | 第99-100页 |
| 3 讨论 | 第100-103页 |
| 第六章 全基因组鉴定和分析大白菜R2R3-MYB转录因子家族 | 第103-123页 |
| 引言 | 第104-105页 |
| 1 材料与方法 | 第105-108页 |
| 1.1 材料 | 第105-106页 |
| 1.1.1 植物材料及处理 | 第105页 |
| 1.1.2 生物信息学工具 | 第105-106页 |
| 1.2 方法 | 第106-108页 |
| 1.2.1 白菜类作物CBF基因启动子分析 | 第106页 |
| 1.2.2 MYB转录因子的鉴定 | 第106页 |
| 1.2.3 蛋白质的性质和保守基序分析 | 第106-107页 |
| 1.2.4 多序列比对和进化树分析 | 第107页 |
| 1.2.5 共线性分析与Ka/Ks计算 | 第107页 |
| 1.2.6 表达谱分析 | 第107页 |
| 1.2.7 实时定量分析 | 第107-108页 |
| 2 结果与分析 | 第108-122页 |
| 2.1 白菜类作物CBF基因的启动子顺式元件分析 | 第108-109页 |
| 2.2 大白菜MYB转录因子的鉴定 | 第109-111页 |
| 2.3 大白菜R2R3-MYB转录因子保守结构域分析 | 第111-112页 |
| 2.4 R2R3-BrMYB基因家族的染色体定位 | 第112页 |
| 2.5 R2R3-BrMYB基因家族的共线性分析 | 第112-114页 |
| 2.6 进化树和保守基序分析 | 第114-118页 |
| 2.7 表达谱分析 | 第118-120页 |
| 2.8 R2R3-BrMYB的在胁迫处理下的表达分析 | 第120-122页 |
| 3 讨论 | 第122-123页 |
| 全文结论 | 第123-125页 |
| 创新点 | 第125-127页 |
| 参考文献 | 第127-149页 |
| 附表 | 第149-169页 |
| 论文发表情况 | 第169-171页 |
| 致谢 | 第171页 |
