| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 手性化合物与手性醇 | 第12-14页 |
| 1.1.1 手性化合物 | 第12页 |
| 1.1.2 手性醇 | 第12-14页 |
| 1.2 酮还原酶概述 | 第14-19页 |
| 1.2.1 酮还原酶的分类及来源 | 第14页 |
| 1.2.2 酮还原酶的挖掘 | 第14-15页 |
| 1.2.3 酮还原酶的催化机理 | 第15页 |
| 1.2.4 酮还原酶在手性醇合成中的应用 | 第15-17页 |
| 1.2.5 辅酶再生 | 第17-19页 |
| 1.3 克里唑替尼 | 第19-23页 |
| 1.3.1 克里唑替尼 | 第19-20页 |
| 1.3.2 克里唑替尼的合成路径 | 第20-22页 |
| 1.3.3 (S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇的制备 | 第22-23页 |
| 1.4 论文目的,意义及研究内容 | 第23-25页 |
| 1.4.1 本论文的研究目的及意义 | 第23页 |
| 1.4.2 本论文的主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 酮还原酶的克隆表达及纯化 | 第25-39页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要使用仪器和设备 | 第26-27页 |
| 2.2.3 质粒、菌株、培养基和缓冲液 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.3.1 酮还原酶基因PCR扩增 | 第28页 |
| 2.3.2 PCR产物纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 表达载体和基因的双酶切 | 第29页 |
| 2.3.4 DNA胶回收 | 第29页 |
| 2.3.5 连接 | 第29页 |
| 2.3.6 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第29-30页 |
| 2.3.7 质粒抽提 | 第30页 |
| 2.3.8 酮还原酶的诱导表达 | 第30页 |
| 2.3.9 粗酶液的获取 | 第30页 |
| 2.3.10 重组酮还原酶的纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.11 蛋白浓度的测定 | 第31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-38页 |
| 2.4.1 酮还原酶的挖掘 | 第31-32页 |
| 2.4.2 酮还原酶的氨基酸序列分析 | 第32-35页 |
| 2.4.3 酮还原酶的克隆,表达与纯化 | 第35-37页 |
| 2.4.4 酮还原酶的蛋白浓度测定 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 酮还原酶的酶学性质研究 | 第39-53页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第39页 |
| 3.2.2 主要使用仪器和设备 | 第39页 |
| 3.2.3 酶、培养基和缓冲液 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-43页 |
| 3.3.1 酶活力的测定 | 第40页 |
| 3.3.2 辅酶依赖型的测定 | 第40-41页 |
| 3.3.3 酶最适温度和pH的测定 | 第41页 |
| 3.3.4 酶热稳定性和酸碱稳定性的测定 | 第41页 |
| 3.3.5 金属离子对酶活性影响的研究 | 第41页 |
| 3.3.6 底物谱的测定 | 第41-42页 |
| 3.3.7 动力学参数的测定 | 第42页 |
| 3.3.8 重组酮还原酶的粗酶液制备 | 第42页 |
| 3.3.9 重组葡萄糖脱氢酶的干细胞制备 | 第42页 |
| 3.3.10 酮还原酶催化不对称还原反应的研究 | 第42-43页 |
| 3.3.11 分析方法 | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-52页 |
| 3.4.1 辅酶依赖型的测定 | 第43页 |
| 3.4.2 温度对酶活性的影响 | 第43-45页 |
| 3.4.3 pH对酶活性的影响 | 第45-47页 |
| 3.4.4 金属离子对酶活性的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.5 底物谱的测定 | 第48-49页 |
| 3.4.6 动力学参数的测定 | 第49-51页 |
| 3.4.7 酮还原酶催化不对称还原反应的研究 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 (S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇的制备 | 第53-63页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第53页 |
| 4.2.2 主要使用仪器和设备 | 第53-54页 |
| 4.2.3 酶,培养基和缓冲液 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 4.3.1 酮还原酶的诱导表达 | 第54页 |
| 4.3.2 酮还原酶的筛选 | 第54-55页 |
| 4.3.3 发酵操作 | 第55-56页 |
| 4.3.4 不对称合成(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇的反应 | 第56页 |
| 4.3.5 分析方法 | 第56-57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-62页 |
| 4.4.1 酶的筛选 | 第57-58页 |
| 4.4.2 底物浓度的放大 | 第58-60页 |
| 4.4.3 产物纯化条件的探索 | 第60-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 结论和展望 | 第63-65页 |
| 5.1 结论 | 第63-64页 |
| 5.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 硕士期间论文专利发表情况 | 第71页 |
