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猪源噬菌体单链抗体库的构建及抗rSpaA单链抗体的筛选

摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述第9-23页
    1.1 scFv及scFv库的构建第9-14页
        1.1.1 抗体及抗体基因的结构和功能概述第9-11页
        1.1.2 抗体技术的发展概述第11-12页
        1.1.3 单链抗体的生物学特性及scFv文库的构建第12-14页
    1.3 噬菌体单链抗体库展示技术概述第14-17页
        1.3.1 噬菌体展示技术原理第14-15页
        1.3.2 噬菌体展示系统分类第15-17页
    1.4 单链抗体库的亲和淘选第17-18页
    1.5 单链抗体的表达系统第18-19页
    1.6 单链抗体的应用第19-23页
        1.6.1 单链抗体在靶向治疗方面的应用第19-20页
        1.6.2 单链抗体在检测诊断方面的应用第20-21页
        1.6.3 单链抗体的研究和应用展望第21-23页
第二章 猪源噬菌体单链抗体库的构建第23-35页
    2.1 材料第23-24页
        2.1.1 主要生物材料第23页
        2.1.2 主要试剂第23页
        2.1.3 主要仪器设备第23页
        2.1.4 引物第23-24页
    2.2 方法第24-30页
        2.2.1 猪脾淋巴细胞总RNA提取及评价第24-25页
        2.2.2 提取的RNA反转录合成cDNA第25页
        2.2.3 扩增重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)第25页
        2.2.4 PCR产物的纯化与回收第25-26页
        2.2.5 扩增VH-Linker和VL-Linker基因第26页
        2.2.6 重叠延伸PCR(SOE-PCR)拼接scFv基因第26-27页
        2.2.7 scFv基因的T-A亚克隆鉴定第27页
        2.2.8 重组载体pComb3Xss-scFv连接产物的制备第27-29页
        2.2.9 重组pComb3Xss-scFv连接产物的转化第29-30页
        2.2.10 scFv基因库的保存第30页
    2.3 结果与分析第30-33页
        2.3.1 猪脾淋巴细胞总RNA的提取第30页
        2.3.2 猪源抗体VH和VL基因的扩增第30-31页
        2.3.3 添加部分linker基因的VH-Linker和VL-Linker片段制备第31页
        2.3.4 scFv基因的SOE-PCR拼接第31-32页
        2.3.5 scFv基因T-A克隆的PCR鉴定第32页
        2.3.6 scFv基因库的构建与鉴定第32-33页
    2.4 讨论第33-35页
第三章 噬菌体单链抗体文库的免疫亲和富集第35-43页
    3.1 材料第35页
        3.1.1 主要生物材料第35页
        3.1.2 主要试剂第35页
        3.1.3 主要仪器设备第35页
    3.2 方法第35-39页
        3.2.1 噬菌体单链抗体初级文库的转化第35-36页
        3.2.2 噬菌体单链抗体初级文库的转化及抗体库滴度测定第36-37页
        3.2.3 噬菌体单链抗体初级文库的免疫亲和筛选和富集第37-39页
    3.3 结果与分析第39-42页
        3.3.1 辅助噬菌体M13KO7的滴度测定第39页
        3.3.2 噬菌体单链抗体初级库的滴度测定第39页
        3.3.3 免疫亲和筛选条件的优化选择第39-41页
        3.3.4 噬菌体单链抗体库的富集筛选第41-42页
    3.4 讨论第42-43页
第四章 特异性抗rSpaA单链抗体的鉴定和原核表达第43-57页
    4.1 材料第43页
        4.1.1 主要生物材料第43页
        4.1.2 主要试剂第43页
        4.1.3 主要仪器设备第43页
    4.2 方法第43-46页
        4.2.1 特异性噬菌体scFv的PCR鉴定第43页
        4.2.2 阳性噬菌体scFv的免疫亲和筛选第43-44页
        4.2.3 噬菌体scFv的Phage-ELISA检测第44页
        4.2.4 噬菌体scFv的特异性验证第44-45页
        4.2.5 筛选scFv的抗体片段序列分析第45页
        4.2.6 阳性噬菌体scFv的保存第45页
        4.2.7 抗rSpaA单链抗体的原核表达第45-46页
    4.3 结果与分析第46-55页
        4.3.1 特异性scFv的PCR鉴定第46-47页
        4.3.2 噬菌体单链抗体phage-ELISA结果第47-48页
        4.3.3 噬菌体scFv的特异性验证第48-49页
        4.3.4 scFv的测序结果和分析第49-52页
        4.3.5 筛选scFv基因的扩增第52页
        4.3.6 筛选scFv基因和pET28a的酶切第52-53页
        4.3.7 重组质粒转化子的PCR鉴定第53-54页
        4.3.8 重组scFv的表达第54-55页
    4.4 讨论第55-57页
结论第57-59页
参考文献第59-69页
致谢第69-70页
个人简历第70页

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