摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5页 |
第一章 文献综述 | 第9-23页 |
1.1 scFv及scFv库的构建 | 第9-14页 |
1.1.1 抗体及抗体基因的结构和功能概述 | 第9-11页 |
1.1.2 抗体技术的发展概述 | 第11-12页 |
1.1.3 单链抗体的生物学特性及scFv文库的构建 | 第12-14页 |
1.3 噬菌体单链抗体库展示技术概述 | 第14-17页 |
1.3.1 噬菌体展示技术原理 | 第14-15页 |
1.3.2 噬菌体展示系统分类 | 第15-17页 |
1.4 单链抗体库的亲和淘选 | 第17-18页 |
1.5 单链抗体的表达系统 | 第18-19页 |
1.6 单链抗体的应用 | 第19-23页 |
1.6.1 单链抗体在靶向治疗方面的应用 | 第19-20页 |
1.6.2 单链抗体在检测诊断方面的应用 | 第20-21页 |
1.6.3 单链抗体的研究和应用展望 | 第21-23页 |
第二章 猪源噬菌体单链抗体库的构建 | 第23-35页 |
2.1 材料 | 第23-24页 |
2.1.1 主要生物材料 | 第23页 |
2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第23页 |
2.1.4 引物 | 第23-24页 |
2.2 方法 | 第24-30页 |
2.2.1 猪脾淋巴细胞总RNA提取及评价 | 第24-25页 |
2.2.2 提取的RNA反转录合成cDNA | 第25页 |
2.2.3 扩增重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL) | 第25页 |
2.2.4 PCR产物的纯化与回收 | 第25-26页 |
2.2.5 扩增VH-Linker和VL-Linker基因 | 第26页 |
2.2.6 重叠延伸PCR(SOE-PCR)拼接scFv基因 | 第26-27页 |
2.2.7 scFv基因的T-A亚克隆鉴定 | 第27页 |
2.2.8 重组载体pComb3Xss-scFv连接产物的制备 | 第27-29页 |
2.2.9 重组pComb3Xss-scFv连接产物的转化 | 第29-30页 |
2.2.10 scFv基因库的保存 | 第30页 |
2.3 结果与分析 | 第30-33页 |
2.3.1 猪脾淋巴细胞总RNA的提取 | 第30页 |
2.3.2 猪源抗体VH和VL基因的扩增 | 第30-31页 |
2.3.3 添加部分linker基因的VH-Linker和VL-Linker片段制备 | 第31页 |
2.3.4 scFv基因的SOE-PCR拼接 | 第31-32页 |
2.3.5 scFv基因T-A克隆的PCR鉴定 | 第32页 |
2.3.6 scFv基因库的构建与鉴定 | 第32-33页 |
2.4 讨论 | 第33-35页 |
第三章 噬菌体单链抗体文库的免疫亲和富集 | 第35-43页 |
3.1 材料 | 第35页 |
3.1.1 主要生物材料 | 第35页 |
3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
3.1.3 主要仪器设备 | 第35页 |
3.2 方法 | 第35-39页 |
3.2.1 噬菌体单链抗体初级文库的转化 | 第35-36页 |
3.2.2 噬菌体单链抗体初级文库的转化及抗体库滴度测定 | 第36-37页 |
3.2.3 噬菌体单链抗体初级文库的免疫亲和筛选和富集 | 第37-39页 |
3.3 结果与分析 | 第39-42页 |
3.3.1 辅助噬菌体M13KO7的滴度测定 | 第39页 |
3.3.2 噬菌体单链抗体初级库的滴度测定 | 第39页 |
3.3.3 免疫亲和筛选条件的优化选择 | 第39-41页 |
3.3.4 噬菌体单链抗体库的富集筛选 | 第41-42页 |
3.4 讨论 | 第42-43页 |
第四章 特异性抗rSpaA单链抗体的鉴定和原核表达 | 第43-57页 |
4.1 材料 | 第43页 |
4.1.1 主要生物材料 | 第43页 |
4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
4.1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
4.2 方法 | 第43-46页 |
4.2.1 特异性噬菌体scFv的PCR鉴定 | 第43页 |
4.2.2 阳性噬菌体scFv的免疫亲和筛选 | 第43-44页 |
4.2.3 噬菌体scFv的Phage-ELISA检测 | 第44页 |
4.2.4 噬菌体scFv的特异性验证 | 第44-45页 |
4.2.5 筛选scFv的抗体片段序列分析 | 第45页 |
4.2.6 阳性噬菌体scFv的保存 | 第45页 |
4.2.7 抗rSpaA单链抗体的原核表达 | 第45-46页 |
4.3 结果与分析 | 第46-55页 |
4.3.1 特异性scFv的PCR鉴定 | 第46-47页 |
4.3.2 噬菌体单链抗体phage-ELISA结果 | 第47-48页 |
4.3.3 噬菌体scFv的特异性验证 | 第48-49页 |
4.3.4 scFv的测序结果和分析 | 第49-52页 |
4.3.5 筛选scFv基因的扩增 | 第52页 |
4.3.6 筛选scFv基因和pET28a的酶切 | 第52-53页 |
4.3.7 重组质粒转化子的PCR鉴定 | 第53-54页 |
4.3.8 重组scFv的表达 | 第54-55页 |
4.4 讨论 | 第55-57页 |
结论 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-69页 |
致谢 | 第69-70页 |
个人简历 | 第70页 |