| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 论文缩略词表 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 蛙病毒概述 | 第12-17页 |
| ·蛙病毒生物学特性 | 第12-13页 |
| ·蛙病毒的复制周期 | 第13-14页 |
| ·蛙病毒的主要功能基因 | 第14-16页 |
| ·蛙病毒的感染特性 | 第16-17页 |
| ·大鲵蛙病毒 | 第17页 |
| 2 RNA干扰(RNA interference,RNAi) | 第17-24页 |
| ·RNA干扰现象的发现 | 第17-18页 |
| ·RNA干扰的作用机制 | 第18-19页 |
| ·获得siRNA的方法 | 第19-21页 |
| ·展望未来 | 第21-24页 |
| 3 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 siRNA对CGSRV病毒MCP、MTases、DNA polymerase基因的干扰 | 第25-42页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| ·大鲵蛙病毒(CGSRV)悬液 | 第25页 |
| ·细胞株 | 第25页 |
| ·细胞培养基 | 第25-26页 |
| ·溶液及试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-30页 |
| ·siRNA靶序列的设计与合成 | 第26-27页 |
| ·EPC细胞的传代培养 | 第27页 |
| ·siRNA转染浓度的优化 | 第27-28页 |
| ·最适病毒浓度的优化 | 第28-29页 |
| ·siRNA对MCP、MTases、DNA polymerase基因的干扰 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-39页 |
| ·siRNA靶序列的设计与合成 | 第30-31页 |
| ·siRNA转染浓度的优化 | 第31-33页 |
| ·最适病毒浓度的优化 | 第33页 |
| ·siRNA对MCP、MTases、DNA polymerase基因的干扰 | 第33-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| ·siRNA的设计与合成 | 第39页 |
| ·siRNA转染影响因素 | 第39-40页 |
| ·siRNA的干扰 | 第40-41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 荧光定量PCR法和病毒滴度(TCIDso)法检测siRNA的干扰效果 | 第42-60页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| ·CGSRV病毒悬液 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·主要试剂配制方法 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-48页 |
| ·荧光定量PCR(qRT-PCR)引物设计与合成 | 第43-44页 |
| ·总RNA提取 | 第44-45页 |
| ·RNA纯度及浓度检测 | 第45页 |
| ·RNA反转录(RT-PCR) | 第45-47页 |
| ·退火温度的优化与标准曲线的建立 | 第47页 |
| ·MCP、MTases、DNA polymerase基因表达量的检测 | 第47-48页 |
| ·病毒滴度(TCID_(50))测定 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-57页 |
| ·RNA纯度和浓度检测 | 第48-49页 |
| ·退火温度的优化 | 第49页 |
| ·标准曲线及扩增效率 | 第49-51页 |
| ·RNA干扰后各基因在不同时间点的相对表达 | 第51-56页 |
| ·病毒滴度(TCID_(50))测定 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表及参与发表的学术论文 | 第65页 |
