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RNA干扰对大鲵蛙病毒(CGSRV)主要功能基因表达与增殖影响的研究

中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-9页
论文缩略词表第9-12页
第一章 文献综述第12-25页
 1 蛙病毒概述第12-17页
   ·蛙病毒生物学特性第12-13页
   ·蛙病毒的复制周期第13-14页
   ·蛙病毒的主要功能基因第14-16页
   ·蛙病毒的感染特性第16-17页
   ·大鲵蛙病毒第17页
 2 RNA干扰(RNA interference,RNAi)第17-24页
   ·RNA干扰现象的发现第17-18页
   ·RNA干扰的作用机制第18-19页
   ·获得siRNA的方法第19-21页
   ·展望未来第21-24页
 3 研究目的与意义第24-25页
第二章 siRNA对CGSRV病毒MCP、MTases、DNA polymerase基因的干扰第25-42页
 1 实验材料第25-26页
   ·大鲵蛙病毒(CGSRV)悬液第25页
   ·细胞株第25页
   ·细胞培养基第25-26页
   ·溶液及试剂第26页
   ·主要仪器第26页
 2 方法第26-30页
   ·siRNA靶序列的设计与合成第26-27页
   ·EPC细胞的传代培养第27页
   ·siRNA转染浓度的优化第27-28页
   ·最适病毒浓度的优化第28-29页
   ·siRNA对MCP、MTases、DNA polymerase基因的干扰第29-30页
 3 结果与分析第30-39页
   ·siRNA靶序列的设计与合成第30-31页
   ·siRNA转染浓度的优化第31-33页
   ·最适病毒浓度的优化第33页
   ·siRNA对MCP、MTases、DNA polymerase基因的干扰第33-39页
 4 讨论第39-41页
   ·siRNA的设计与合成第39页
   ·siRNA转染影响因素第39-40页
   ·siRNA的干扰第40-41页
 5 小结第41-42页
第三章 荧光定量PCR法和病毒滴度(TCIDso)法检测siRNA的干扰效果第42-60页
 1 实验材料第42-43页
   ·CGSRV病毒悬液第42页
   ·实验试剂第42-43页
   ·主要仪器第43页
   ·主要试剂配制方法第43页
 2 方法第43-48页
   ·荧光定量PCR(qRT-PCR)引物设计与合成第43-44页
   ·总RNA提取第44-45页
   ·RNA纯度及浓度检测第45页
   ·RNA反转录(RT-PCR)第45-47页
   ·退火温度的优化与标准曲线的建立第47页
   ·MCP、MTases、DNA polymerase基因表达量的检测第47-48页
   ·病毒滴度(TCID_(50))测定第48页
 3 结果与分析第48-57页
   ·RNA纯度和浓度检测第48-49页
   ·退火温度的优化第49页
   ·标准曲线及扩增效率第49-51页
   ·RNA干扰后各基因在不同时间点的相对表达第51-56页
   ·病毒滴度(TCID_(50))测定第56-57页
 4 讨论第57-59页
 5 小结第59-60页
结论第60-61页
参考文献第61-64页
致谢第64-65页
攻读硕士学位期间发表及参与发表的学术论文第65页

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