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慈竹bZIP转录因子的克隆及其遗传转化研究

摘要第1-6页
Abstract第6-13页
1 绪论第13-21页
   ·研究意义第13-14页
   ·国内外研究现状第14-18页
     ·bZIP转录因子的概述第14-17页
     ·bZIP转录因子的研究现状第17-18页
   ·过表达载体构建技术第18页
   ·酵母单杂交技术第18-19页
   ·转录组测序第19页
   ·实时定量PCR技术第19-20页
   ·试验研究内容以及技术路线图第20-21页
     ·试验研究内容第20页
     ·试验技术路线图第20-21页
2 慈竹BebZIP基因的克隆第21-50页
   ·试验材料与主要仪器第21-22页
     ·试验材料第21页
     ·试验用主要仪器第21页
     ·试验用主要试剂和菌种第21-22页
     ·试验用其它主要试剂的配制第22页
   ·慈竹BebZIP基因的克隆第22-32页
     ·慈竹笋总RNA的提取第22-23页
     ·慈竹cDNA的合成第23-24页
     ·慈竹BebZIP基因的克隆第24-28页
     ·慈竹BebZIP基因的生物信息学分析第28-32页
   ·结果与分析第32-47页
     ·慈竹BebZIP基因全长克隆第32-36页
     ·慈竹BebZIP基因生物信息学分析第36-47页
   ·结论与讨论第47-50页
3 慈竹bZIP转录因子的转录活性分析第50-64页
   ·试验材料与主要仪器第50-51页
     ·菌种和质粒第50页
     ·试验用主要试剂第50页
     ·试验主要试剂配制方法第50-51页
     ·试验用主要仪器第51页
   ·试验方法第51-57页
     ·慈竹BebZIP基因引物设计第51-52页
     ·慈竹BebZIP基因全长(含酶切位点)扩增第52-53页
     ·慈竹BebZIP全长基因 (含有酶切位点)PCR产物的胶回收和连接第53-54页
     ·大肠杆菌感受态的制备和转化第54页
     ·菌落蓝白斑筛选、摇菌和质粒提取第54页
     ·pMD19-T-BebZIPs质粒以及pEG202质粒双酶切第54-55页
     ·pMD19-T-BebZIPs质粒和pEG202质粒酶切胶回收第55页
     ·酵母单杂交载体pEG202-BebZIPs的构建第55-56页
     ·阳性克隆的筛选以及双酶切验证第56-57页
     ·酵母EGY48感受态的制备及酵母转化第57页
   ·结果与分析第57-63页
     ·慈竹BebZIP基因全长(含酶切位点)的扩增第57-58页
     ·慈竹pMD19-T-BebZIPs质粒以及pEG202质粒双酶切第58-60页
     ·慈竹BebZIP基因酵母单杂交载体的构建以及双酶切验证第60-61页
     ·慈竹BebZIP基因酵母菌菌液PCR鉴定第61-62页
     ·慈竹BebZIP转录因子的转录活性分析第62-63页
   ·结论与讨论第63-64页
4 慈竹BebZIP基因的组织表达模式分析第64-71页
   ·试验材料、试剂和仪器设备第64页
     ·植物材料第64页
     ·主要试剂第64页
     ·仪器设备第64页
   ·慈竹BebZIP基因的组织模式表达分析第64-67页
     ·慈竹各组织的总RNA提取第64页
     ·慈竹各组织的cDNA的合成第64页
     ·慈竹BebZIP和Tubulin基因real-time引物设计第64-65页
     ·Real-time PCR引物特异性检测第65-66页
     ·Real-time PCR体系与反应程序第66-67页
     ·数据处理第67页
   ·结果与分析第67-69页
     ·慈竹各组织RNA提取第67-68页
     ·Real-time PCR引物特异性检测第68页
     ·慈竹BebZIP基因的表达分析第68-69页
   ·结论与讨论第69-71页
5 胁迫处理对BebZIP基因转录水平的影响第71-77页
   ·试验材料、试剂以及设备仪器第71页
     ·植物材料第71页
     ·试验试剂第71页
     ·试验仪器设备第71页
   ·试验方法第71-73页
     ·慈竹幼苗的培育和胁迫处理第71-73页
     ·胁迫处理后总RNA的提取第73页
     ·胁迫处理后cDNA的合成第73页
     ·慈竹BebZIP和Tubulin基因real-time引物设计第73页
     ·Real-time PCR引物特异性检测第73页
     ·Real-time PCR体系与反应程序第73页
     ·数据处理第73页
   ·结果与分析第73-76页
     ·植物表型分析第73-74页
     ·胁迫处理下慈竹RNA提取第74-75页
     ·慈竹BebZIP基因在各种胁迫下差异性表达分析第75-76页
   ·结论与讨论第76-77页
6 慈竹BebZIP基因过表达载体的构建第77-85页
   ·试验材料及仪器第77页
     ·试验菌种、质粒及试剂第77页
     ·试验主要仪器第77页
   ·试验方法第77-82页
     ·慈竹BebZIP6全长基因过表达引物设计第77页
     ·慈竹BebZIP6基因全长(含有酶切位点)的扩增第77-78页
     ·慈竹BebZIP6全长基因 (含有酶切位点)PCR产物的胶回收和连接第78-79页
     ·大肠杆菌感受态的制备和转化第79页
     ·菌落蓝白斑筛选、摇菌和质粒提取第79页
     ·pMD19-T-BebZIP6质粒以及pCAMBIA 1303质粒双酶切第79-80页
     ·pMD19-T-BebZIP6质粒和pCAMBIA 1303质粒酶切胶回收第80页
     ·过表达载体pCAMBIA1303–BebZIP6的构建第80页
     ·阳性克隆的筛选以及质粒PCR验证第80-82页
   ·结果分析第82-84页
     ·慈竹BebZIP6基因全长(含酶切位点)的扩增以及pCAMBIA 1303质粒酶切第82-83页
     ·BebZIP6基因植物过表达载体的构建第83-84页
       ·质粒PCR验证第83-84页
   ·结论第84-85页
7 慈竹pCAMBIA1303-BebZIP6质粒转化青杨第85-91页
   ·试验材料和仪器第85-86页
     ·试验材料、试剂及培养基配方第85-86页
     ·试验工具与仪器第86页
   ·试验方法第86-89页
     ·青杨无菌苗的培育第86页
     ·pCAMBIA1303–BebZIP6质粒转化农杆菌第86-87页
     ·叶盘法转化青杨叶片第87-88页
     ·转基因青杨植物的验证第88-89页
   ·结果分析第89-90页
     ·BebZIP6过表达转基因青杨抗性苗的获得以及阳性苗的验证第89-90页
   ·结论第90-91页
8 结论第91-93页
参考文献第93-101页
致谢第101-102页
攻读硕士学位期间的学术科研情况第102页

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