| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第一部分 综述 MAPK途径在真核生物体内的作用机制及应激响应研究 | 第13-41页 |
| 1 哺乳动物MAPK信号通路 | 第13-17页 |
| ·哺乳动物p38信号通路 | 第13-17页 |
| ·p38的上游激酶 | 第14-15页 |
| ·p38的下游底物 | 第15-16页 |
| ·p38激活的转录因子 | 第16页 |
| ·哺乳动物p38信号通路与热应激的关系 | 第16-17页 |
| ·哺乳动物p38信号通路与冷应激的关系 | 第17页 |
| 2 植物中的MAPK信号通路 | 第17-22页 |
| ·植物体内MAPK分类 | 第17-18页 |
| ·MAPK参与的胁迫反应 | 第18-22页 |
| ·温度胁迫反应 | 第18页 |
| ·氧化胁迫响应 | 第18-19页 |
| ·盐胁迫响应 | 第19页 |
| ·干旱胁迫响应 | 第19-20页 |
| ·损伤胁迫响应 | 第20页 |
| ·重金属胁迫响应 | 第20-22页 |
| 3 昆虫的p38信号通路 | 第22-24页 |
| ·昆虫p38的分类 | 第22页 |
| ·昆虫p38信号与免疫响应 | 第22-23页 |
| ·昆虫p38信号与冷胁迫 | 第23-24页 |
| 4 酵母HOG1通路 | 第24-26页 |
| ·HOG途径的组成 | 第24-25页 |
| ·HOG途径的功能 | 第25-26页 |
| ·HOG途径与高渗胁迫响应 | 第25页 |
| ·HOG途径与氧化胁迫响应 | 第25-26页 |
| ·HOG与低温胁迫 | 第26页 |
| 4 本研究问题的提出及研究意义 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-41页 |
| 第二部分 实验部分 | 第41-115页 |
| 第一章 小胸鳖甲低温转录组中p38信号通路相关基因的筛选与生物信息学分析 | 第41-54页 |
| 1 材料与方法 | 第42-43页 |
| ·序列来源 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·Mpp38和MpMAPKAPK2的理化性质分析 | 第42页 |
| ·p38MAPK结构及功能预测 | 第42-43页 |
| ·蛋白质相互作用预测 | 第43页 |
| ·系统发育树 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-50页 |
| ·小胸鳖甲p38和MAPKAPK2的氨基酸组成及理化性质预测 | 第43-46页 |
| ·Mpp38和MpMAPKAPK2亚细胞定位预测 | 第46页 |
| ·小胸鳖甲p38和MAPKAPK2蛋白的磷酸化位点分析 | 第46-47页 |
| ·小胸鳖甲p38和MAPKAPK2的三维结构预测及磷酸化位点分析 | 第47-48页 |
| ·p38信号通路中与p38相互作用蛋白预测 | 第48页 |
| ·小胸鳖甲p38和MAPKAPK2系统树构建 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第二章 p38信号通路相关基因低温表达谱 | 第54-78页 |
| 1 材料与方法 | 第55-59页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·试虫 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要实验仪器 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-59页 |
| ·试虫总RNA的提取及cDNA合成 | 第55-57页 |
| ·小胸鳖甲p38信号通路相关基因的筛选及标准质粒的构建 | 第57-58页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第58-59页 |
| ·数据分析 | 第59页 |
| 2 结果 | 第59-73页 |
| ·小胸鳖甲试虫总RNA提取 | 第59-60页 |
| ·小胸鳖甲p38信号通路相关基因标准质粒的构建 | 第60-63页 |
| ·p38信号通路相关基因标准曲线和溶解曲线测定 | 第63-65页 |
| ·低温对小胸鳖甲成虫p38MAPK信号通路各基因表达的影响 | 第65-73页 |
| ·MKKK各激酶的表达谱 | 第65-66页 |
| ·MKK各激酶的表达谱 | 第66-67页 |
| ·MK各激酶的表达谱 | 第67-68页 |
| ·胞质底物各基因表达谱 | 第68-69页 |
| ·p38信号通路下游激酶表达谱 | 第69页 |
| ·上游激酶辅助因子 | 第69-70页 |
| ·细胞核内下游激酶调控因子 | 第70-71页 |
| ·小胸鳖甲p38信号通路的低温响应机制 | 第71-73页 |
| 讨论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 第三章 小胸鳖甲p38MAPK的原核表达及功能验证 | 第78-92页 |
| 1 材料与方法 | 第79-83页 |
| ·实验材料 | 第79页 |
| ·菌株与载体 | 第79页 |
| ·试剂 | 第79页 |
| ·主要实验仪器 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-83页 |
| ·Mpp38基因的克隆 | 第79-80页 |
| ·Mpp38基因原核表达载体的构建 | 第80-81页 |
| ·融合蛋白His-Mpp38在大肠杆菌中的表达 | 第81-82页 |
| ·Western blotting检测His-Mpp38 | 第82页 |
| ·小胸鳖甲成虫总蛋白的提取及p38磷酸化水平检测 | 第82页 |
| ·抗冻功能验证 | 第82页 |
| ·转基因大肠杆菌脯氨酸含量测定 | 第82-83页 |
| ·转基因大肠杆菌海藻糖含量测定 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-89页 |
| ·Mpp38基因的克隆 | 第83-84页 |
| ·Mpp38基因原核表达载体的构建 | 第84页 |
| ·融合蛋白His-Mpp38的诱导表达及Western Blot鉴定 | 第84-86页 |
| ·小胸鳖甲p38的活性检测 | 第86页 |
| ·BL21(pET28a-Mpp38)和BL21(pET28a)的抗冻性分析 | 第86-87页 |
| ·转基因大肠杆菌BL21海藻糖及脯氨酸含量的测定 | 第87-89页 |
| 讨论 | 第89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 第四章 p38MAPK激酶在酵母中的功能验证 | 第92-115页 |
| 1 材料 | 第93页 |
| ·实验材料 | 第93页 |
| 2 实验方法 | 第93-97页 |
| ·构建pYES2-Mpp38真核表达载体 | 第93-94页 |
| ·INVSC1感受态的制备、电转及阳性克隆筛选 | 第94页 |
| ·酵母外源基因Mpp38的诱导表达 | 第94页 |
| ·酵母蛋白提取及SDS-PAGE电泳检测 | 第94-95页 |
| ·Western blot检测外源Mpp38蛋白的表达 | 第95页 |
| ·转基因酵母的抗冻分析 | 第95-96页 |
| ·转基因酵母的生长曲线测定 | 第95页 |
| ·转基因酵母低温处理时的菌落数观察 | 第95-96页 |
| ·转基因酵母生理生化水平检测 | 第96页 |
| ·转基因酵母脯氨酸含量测定 | 第96页 |
| ·转基因酵母海藻糖含量测定 | 第96页 |
| ·转基因酵母H2O2含量测定 | 第96页 |
| ·转基因酵母甘油含量测定 | 第96页 |
| ·转基因酵母HOG1信号通路相关基因低温表达谱检测 | 第96-97页 |
| ·酿酒酵母总RNA的提取及反转录 | 第96页 |
| ·酿酒酵母HOG1通路相关基因标准质粒的构建 | 第96-97页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)反应 | 第97页 |
| ·数据分析 | 第97页 |
| 3 结果 | 第97-110页 |
| ·构建pYES2-Mpp38真核表达载体 | 第97-98页 |
| ·重组质粒pYES–Mpp38转化酿酒酵母及阳性菌株的筛选 | 第98-99页 |
| ·外源蛋白Mpp38的诱导表达及Western-blot检测 | 第99-100页 |
| ·不同诱导时间p38蛋白磷酸化水平检测 | 第100页 |
| ·转基因酵母生长曲线测定及低温抗冻分析 | 第100-103页 |
| ·酿酒酵母低温条件下菌落数的变化 | 第103-104页 |
| ·酿酒酵母生理生化检测 | 第104-105页 |
| ·转基因酵母甘油、海藻糖、脯氨酸和H2O2含量的测定 | 第104-105页 |
| ·酿酒酵母HOG1信号通路相关基因的低温表达谱 | 第105-110页 |
| ·HOG1信号通路相关基因的标准质粒的构建 | 第105-107页 |
| ·HOG1信号通路相关基因标准曲线测定 | 第107-108页 |
| ·低温对转基因酵母HOG1信号通路相关基因表达的影响 | 第108-110页 |
| 讨论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-115页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第115-116页 |
| 一、结论 | 第115页 |
| 二、展望 | 第115-116页 |
| 个人简历 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
