| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-29页 |
| 1 昆虫如何应对寒冷环境 | 第10页 |
| 2 抗冻蛋白对生物体的重要意义 | 第10-11页 |
| 3 抗冻蛋白的分类 | 第11页 |
| 4 昆虫抗冻蛋白的结构 | 第11-12页 |
| 5 抗冻蛋白的作用原理 | 第12-14页 |
| ·抗冻蛋白与冰晶的相互作用 | 第12-13页 |
| ·抗冻蛋白与细胞的相互作用 | 第13-14页 |
| 6 抗冻蛋白抗冻效果的影响因素 | 第14页 |
| 7 抗冻蛋白在细胞低温保护领域的研究进展 | 第14-19页 |
| ·细胞玻璃化冷冻的原理 | 第15页 |
| ·常见的细胞冷冻保护剂与抗冻蛋白的比较 | 第15-16页 |
| ·抗冻蛋白在细胞保存中的应用 | 第16-19页 |
| 8 展望 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-29页 |
| 第二部分 实验部分 | 第29-88页 |
| 第一章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 TXT基序对抗冻活性的影响 | 第29-65页 |
| 1. 材料与方法 | 第30-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·常规溶液 | 第30-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第32-33页 |
| ·抗冻蛋白基因ApAFP914及其突变体的克隆 | 第33-36页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第36页 |
| ·融合蛋白Trx A-ApAFP914及其突变体蛋白的表达、SDS-PAGE检测及纯化 | 第36-38页 |
| ·蛋白印迹Western分析 | 第38-39页 |
| ·三维结构模型预测 | 第39页 |
| ·DSC测定融合蛋白TrxA-ApAFP914及其突变体蛋白的热滞活性 | 第39页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP914及其突变体蛋白对大肠杆菌低温保护活性分析 | 第39-41页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP914及其突变体蛋白对红细胞的保护活性分析 | 第41-42页 |
| 2. 结果 | 第42-59页 |
| ·ApAFP914蛋白的序列分析 | 第42页 |
| ·ApAFP914及其突变体的三维结构预测 | 第42-45页 |
| ·原核载体pET32a-ApAFP914的构建 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP914及其突变体的表达纯化及鉴定 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP914及其突变体的热滞活性分析 | 第48-52页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP914对原核及真核细胞的低温保护效果 | 第52-57页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP914对红细胞的低温保护效果 | 第57-59页 |
| 3. 讨论 | 第59-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 第二章 小分子增效剂对光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914的活性增强作用 | 第65-77页 |
| 1. 材料与方法 | 第66-68页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·His-ApAFP914蛋白制备 | 第66-67页 |
| ·融合蛋白His-ApAFP914包涵体的纯化 | 第67-68页 |
| ·热滞活性测定 | 第68页 |
| 2. 结果 | 第68-73页 |
| ·His-ApAFP914的表达纯化 | 第68-69页 |
| ·His-ApAFP914的热滞活性测定 | 第69-70页 |
| ·盐离子对ApAFP914的增效作用 | 第70-71页 |
| ·羟基化合物对ApAFP914的增效作用 | 第71-73页 |
| 3. 讨论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 第三章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914对小鼠卵母细胞的玻璃化冷冻保护活性分析 | 第77-88页 |
| 1. 材料与方法 | 第77-80页 |
| ·实验动物 | 第77页 |
| ·实验材料及试剂 | 第77-78页 |
| ·PMSG及hCG注射量对KM小鼠超数排卵效果的影响及卵母细胞的获得 | 第78页 |
| ·主要实验工具 | 第78页 |
| ·小鼠卵母细胞的玻璃化冷冻方法 | 第78-79页 |
| ·光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914对小鼠卵母细胞的玻璃化冷冻保护方法 | 第79-80页 |
| ·荧光染色法检测小鼠卵母细胞存活率 | 第80页 |
| 2. 结果 | 第80-84页 |
| ·PMSG注射量对小鼠卵母细胞超排效果的影响 | 第80-81页 |
| ·光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914对小鼠卵母细胞的玻璃化冷冻保护效果 | 第81-84页 |
| 3. 讨论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第88-89页 |
| 第四部分 附录 | 第89-91页 |
| 附录1 英文缩略语 | 第89-90页 |
| 附录2 主要实验仪器 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 个人简历 | 第92-93页 |
