| 缩略词表 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 PD-1 及其配体 PD-L1 的发现和功能鉴定 | 第14页 |
| 2 PD-1 及其配体 PD-L1 的结构组成 | 第14-15页 |
| 3 PD-1/PD-L1 的表达分布 | 第15-16页 |
| 4 PD-1/PD-L1 介导着机体 T 细胞免疫抑制通路的激活 | 第16-17页 |
| 5 PD-1/PD-L1 的生物学功能 | 第17-22页 |
| ·在自身免疫性疾病中的作用 | 第17-19页 |
| ·在慢性病毒感染中的作用 | 第19-20页 |
| ·在抗肿瘤免疫中的作用 | 第20-22页 |
| 第二章 鸡 PD-1 及 PD-L1 胞外区基因的克隆表达及鉴定 | 第22-48页 |
| 1 材料 | 第22-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·酶类及其他相关试剂 | 第22-23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·蛋白胶电泳缓冲液 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-35页 |
| ·鸡 PD-1、PD-L1 基因原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·鸡 PD-1、PD-L1 胞外区基因片段 PCR 产物的回收 | 第27-28页 |
| ·鸡 PD-1、PD-L1 胞外区基因片段与 pMD18-T-simple 克隆载体连接 | 第28页 |
| ·鸡 pMD18-T-PD-1/PD-L1 重组克隆质粒基因片段的序列分析 | 第28-32页 |
| ·重组表达质粒的的序列分析 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒在大肠杆菌中的表达 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-45页 |
| ·鸡 PD-1、PD-L1 胞外区基因片段的克隆结果 | 第35-36页 |
| ·鸡 PD-1、PD-L1 胞外区基因片段的序列分析结果 | 第36页 |
| ·原核重组表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·原核重组表达载体的诱导表达及分析鉴定 | 第39-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| ·鸡 PD-1 和 PD-L1 胞外区目的片段的扩增 | 第45页 |
| ·鸡 PD-1 和 PD-L1 胞外区片段的功能 | 第45-46页 |
| ·诱导目的蛋白表达和提高表达量所采取的措施及比较 | 第46页 |
| ·重组目的蛋白的反应原性鉴定 | 第46页 |
| 5 小结 | 第46-48页 |
| 第三章 鸡 PD-1、PD-L1 胞外区重组蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备 | 第48-58页 |
| 1 材料 | 第48-50页 |
| ·抗原蛋白和实验动物 | 第48页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·ELISA 所需的试剂 | 第48-49页 |
| ·蛋白纯化溶液 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE 缓冲液及 Western-blot 缓冲液 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·纯化蛋白浓度测定 | 第51页 |
| ·免疫原的制备 | 第51页 |
| ·动物免疫 | 第51-52页 |
| ·间接 ELISA 反应程序 | 第52页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 兔多抗血清的免疫学活性检测 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-55页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第52-54页 |
| ·纯化 PD-1、PD-L1 胞外区重组蛋白浓度测量结果 | 第54页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 兔多抗血清效价检测 | 第54页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 兔多抗血清的 Western-blot 鉴定 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| ·免疫动物 | 第55-56页 |
| ·多抗血清的 ELISA 检测 | 第56页 |
| ·多抗血清的 Western-blot 验证 | 第56页 |
| 5 小结 | 第56-58页 |
| 全文结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
