| 目录 | 第1-8页 |
| 缩略词表 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| ·PD-1 及其配体 PD-L1 的发现 | 第14-15页 |
| ·PD-1 及其配体 PD-L1 的结构 | 第15-16页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 的存在部位 | 第16-17页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 的功能 | 第17-18页 |
| ·PD-1/PD-L1 途径的生物学功能 | 第18-21页 |
| ·在自身免疫性疾病中的作用 | 第18-19页 |
| ·在慢性病毒感染中的作用 | 第19-20页 |
| ·在抗肿瘤免疫中的作用 | 第20-21页 |
| ·在猪病中的研究进展 | 第21-24页 |
| 第二章 猪 PD-1 及 PD-L1 胞外区基因的原核表达及鉴定 | 第24-50页 |
| ·材料 | 第24-28页 |
| ·菌种和质粒 | 第24页 |
| ·酶类及其它相关试剂 | 第24-25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·蛋白凝胶电泳及 western-blot 缓冲液 | 第26-27页 |
| ·蛋白纯化溶液 | 第27-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-39页 |
| ·猪 PD-1 及 PD-L1 胞外区基因的扩增 | 第28-30页 |
| ·猪 pMD-PD1 及 pMD-PDL1 重组克隆质粒的构建 | 第30-33页 |
| ·猪 pET-32a-PD1 及 pET-32a-PDL1 重组表达质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·重组表达质粒在大肠杆菌中的表达及鉴定 | 第35-38页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-47页 |
| ·猪 PD-1 及 PD-L1 胞外区基因片段的克隆 | 第39-40页 |
| ·猪 PD-1 及 PD-L1 胞外区基因片段的序列分析 | 第40页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第40-43页 |
| ·表达产物的分析及鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第45-46页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·猪 PD-1、PD-L1 胞外区基因重组蛋白纯化后浓度测量 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白原核表达和提高表达量所采取的措施 | 第47-48页 |
| ·重组目的蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 第三章 猪 PD-1 及其配体 PD-L1 生物学活性的初步分析 | 第50-58页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·抗原蛋白和实验动物 | 第50页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| ·ELISA 所需的试剂 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE 缓冲液及 western-blot 缓冲液 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 胞外区多抗的制备 | 第51-52页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 重组蛋白的生物学活性初步鉴定 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-55页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 多抗血清的制备 | 第53-54页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 多抗血清的结合活性分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·免疫动物 | 第55页 |
| ·多克隆抗体的免疫学活性检测 | 第55页 |
| ·PD-1 及 PD-L1 胞外区重组蛋白的生物学活性检测 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 全文结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
