| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-20页 |
| 1 甾醇类化合物的概述 | 第9-10页 |
| ·甾醇类化合物的结构及分布 | 第9-10页 |
| ·胆固醇的性质及生理功能 | 第10页 |
| 2 甾醇药物及关键中间体的制备方法 | 第10-13页 |
| ·甾醇药物的化学合成 | 第11页 |
| ·甾醇化合物的微生物转化 | 第11-13页 |
| ·微生物转化的优势 | 第12页 |
| ·胆固醇微生物的转化 | 第12-13页 |
| 3 微生物P450酶系催化甾体化合物羟基化反应 | 第13-15页 |
| ·细胞色素P450简述 | 第13-14页 |
| ·微生物甾体化合物的羟基化 | 第14-15页 |
| 4 微生物转化甾体的工艺 | 第15-19页 |
| ·影响甾体微生物转化的主要因素 | 第15-16页 |
| ·增加底物溶解及解除产物抑制 | 第16-18页 |
| ·增加底物溶解性 | 第16-17页 |
| ·解除底物与产物的抑制 | 第17-18页 |
| ·菌株改良及发酵工艺的优化 | 第18-19页 |
| ·培育优良菌种 | 第18页 |
| ·发酵工艺的优化 | 第18-19页 |
| 5 本研究主要意义及主要内容 | 第19-20页 |
| ·研究意义及目的 | 第19页 |
| ·研究的主要内容 | 第19-20页 |
| 第二章 胆固醇转化菌株的筛选及鉴定 | 第20-26页 |
| 1 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·试验样品 | 第20页 |
| ·试剂与仪器 | 第20页 |
| ·主要试剂与药品 | 第20页 |
| ·主要仪器与设备 | 第20页 |
| ·培养条件 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·菌种的分离与筛选方法 | 第21页 |
| ·摇瓶发酵转化 | 第21页 |
| ·硅胶薄层层析(TLC)分析测定方法 | 第21页 |
| ·菌株的鉴定 | 第21-22页 |
| ·菌株培养特征、形态观察及部分生理生化特征 | 第21页 |
| ·16S rRNA基因的克隆与测序 | 第21-22页 |
| ·16S rDNA系统发育树的构建 | 第22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-25页 |
| ·菌种筛选结果 | 第22-23页 |
| ·菌株鉴定 | 第23-25页 |
| ·形态与菌落特征 | 第23页 |
| ·生理生化特征 | 第23-24页 |
| ·16S rRNA鉴定结果 | 第24-25页 |
| 3 本章小结 | 第25-26页 |
| 第三章 转化产物的分离与结构鉴定 | 第26-32页 |
| 1 材料与方法 | 第26-27页 |
| ·试验样品 | 第26页 |
| ·试剂与仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂与药品 | 第26页 |
| ·主要仪器与设备 | 第26页 |
| ·转化产物的分离、分析与鉴定方法 | 第26-27页 |
| ·转化产物的提取方法 | 第26-27页 |
| ·转化产物的纯化方法 | 第27页 |
| ·转化产物的鉴定方法 | 第27页 |
| 2 结果与讨论 | 第27-30页 |
| ·转化产物的分离与分析 | 第27-28页 |
| ·转化产物的鉴定 | 第28-30页 |
| ·7β-羟基胆固醇(7-β-hydroxycholestero1)(1)鉴定 | 第28-29页 |
| ·7-酮基胆固醇(7-oxocholestero1)(2)鉴定 | 第29-30页 |
| 3 本章小结 | 第30-32页 |
| 第四章 7β-羟基化酶的分离纯化 | 第32-40页 |
| 1 材料与方法 | 第32-36页 |
| ·试验样品 | 第32页 |
| ·试剂与仪器 | 第32页 |
| ·主要的试剂与药品 | 第32页 |
| ·主要仪器与设备 | 第32页 |
| ·培养条件 | 第32页 |
| ·7β-羟基化酶的分离纯化方法 | 第32-36页 |
| ·实验步骤 | 第33页 |
| ·目标酶的确定方法 | 第33页 |
| ·透析除杂 | 第33-34页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第34-35页 |
| ·酶活性的测定 | 第35页 |
| ·DEAE-52离子交换柱层析 | 第35页 |
| ·Sephadex G200凝胶柱层析 | 第35-36页 |
| ·不连续非变性凝胶电泳和SDS-PAGE电泳 | 第36页 |
| ·蛋白质质谱解析 | 第36页 |
| 2 结果与讨论 | 第36-39页 |
| ·DEAE-52离子交换层析洗脱曲线 | 第36-37页 |
| ·SephadexG-200凝胶柱层析洗脱曲线 | 第37页 |
| ·非变性不连续凝胶电泳 | 第37-38页 |
| ·各步骤蛋白质的分离纯化效果计算 | 第38页 |
| ·7 β-羟基化酶的酶分子量确定 | 第38-39页 |
| ·蛋白质质谱解析 | 第39页 |
| 3 本章小结 | 第39-40页 |
| 第五章 洋葱伯克霍尔德氏菌转化胆固醇制备7β-羟基胆固醇的工艺优化 | 第40-47页 |
| 1 材料与方法 | 第40-41页 |
| ·试验样品 | 第40页 |
| ·试剂与仪器 | 第40页 |
| ·主要试剂和材料 | 第40页 |
| ·主要仪器与设备 | 第40页 |
| ·培养条件 | 第40页 |
| ·7β-羟基胆固醇测定方法 | 第40-41页 |
| ·7β-羟基胆固醇的提取 | 第40-41页 |
| ·7β-羟基胆固醇产率的计算 | 第41页 |
| 2 结果与讨论 | 第41-46页 |
| ·不同碳源及碳源的浓度对7β-羟基胆固醇产率的影响 | 第41-42页 |
| ·不同氮源及氮源浓度对7β-羟基胆固醇产率的影响 | 第42-44页 |
| ·底物添加方式对7β-羟基胆固醇产率的影响 | 第44页 |
| ·转化条件的优化 | 第44-46页 |
| ·初步优化条件下的转化 | 第46页 |
| 3 本章小结 | 第46-47页 |
| 总结与展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 在校期间论文发表情况 | 第63页 |
