| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| ·我国环境污染现状及其危害 | 第12-13页 |
| ·土壤重金属和有机物污染 | 第13-14页 |
| ·治理土壤污染的方法 | 第14-19页 |
| ·物理修复 | 第14-16页 |
| ·物理分离修复 | 第14页 |
| ·土壤蒸汽浸提修复（SVE） | 第14页 |
| ·固定化土壤修复 | 第14-15页 |
| ·玻璃化修复 | 第15页 |
| ·热力学修复 | 第15页 |
| ·热解吸修复技术 | 第15页 |
| ·电动修复 | 第15页 |
| ·冰冻修复技术 | 第15-16页 |
| ·化学修复 | 第16-17页 |
| ·化学淋洗技术 | 第16页 |
| ·化学固定技术 | 第16页 |
| ·原位化学氧化修复技术 | 第16页 |
| ·原位化学还原与脱氯修复技术 | 第16页 |
| ·土壤性能改良技术 | 第16-17页 |
| ·生物修复 | 第17-19页 |
| ·原位处理 | 第17页 |
| ·挖掘堆置处理 | 第17-18页 |
| ·反应器处理 | 第18-19页 |
| ·植物修复 | 第19页 |
| ·紫花苜蓿修复土壤污染 | 第19-24页 |
| ·转基因紫花苜蓿的构建方法 | 第19-20页 |
| ·电击法 | 第19页 |
| ·PEG 介导法 | 第19页 |
| ·显微注射法 | 第19-20页 |
| ·超声波介导法 | 第20页 |
| ·农杆菌介导法 | 第20页 |
| ·转基因紫花苜蓿的改良类型 | 第20-23页 |
| ·抗寒、抗旱转基因 | 第20-21页 |
| ·耐盐碱转基因 | 第21页 |
| ·耐酸铝转基因 | 第21-22页 |
| ·耐湿等其他转基因 | 第22-23页 |
| ·紫花苜蓿愈伤组织的培养 | 第23页 |
| ·转基因紫花苜蓿的种植要点 | 第23-24页 |
| ·紫花苜蓿品种的选择 | 第23页 |
| ·播种要点 | 第23-24页 |
| ·其他要点 | 第24页 |
| ·紫花苜蓿修复土壤的前景 | 第24页 |
| ·研究目的和意义 | 第24-27页 |
| ·金皇后紫花苜蓿简介 | 第24-25页 |
| ·目的基因 GSTP1-l105V 和 CYP2A6 简介 | 第25-26页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 含有 GSTP1-l105V 和 CYP2A6 双质粒农杆菌的转化 | 第27-47页 |
| ·实验材料 | 第27-32页 |
| ·菌种及质粒 | 第27页 |
| ·仪器及设备来源 | 第27页 |
| ·主要试剂来源和溶液配方 | 第27-30页 |
| ·培养基的配制 | 第30-32页 |
| ·实验方法 | 第32-38页 |
| ·单元载体的构建 | 第32页 |
| ·大肠杆菌 DH5α（农杆菌 LBA4404）感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·质粒转化大肠杆菌（农杆菌） | 第32页 |
| ·质粒 DNA 的提取、电泳及目的片段回收 | 第32-34页 |
| ·质粒 DNA 的小量提取（碱裂解法） | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·电泳产物的胶回收 | 第34页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·PCR 验证 | 第35页 |
| ·表达载体 pBI121- GSTP1-l105V、pBI121- CYP2A6 的构建、转化及筛选 | 第35-37页 |
| ·质粒 pBI121 DNA 片段的获得 | 第36页 |
| ·GSTP1-l105V 与 CYP2A6 基因片段的获得 | 第36页 |
| ·表达载体 pBI121- GSTP1-l105V、pBI121- CYP2A6 的构建 | 第36页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 DH5α（农杆菌 LBA4404） | 第36页 |
| ·重组质粒 pBI121- GSTP1-l105V、pBI121- CYP2A6 的提取鉴定 | 第36-37页 |
| ·含 GSTP1-l105V 和 CYP2A6 双质粒农杆菌的转化、鉴定、保存 | 第37-38页 |
| ·CYP2A6 质粒向含 GSTP1-l105V 质粒农杆菌的转化 | 第37页 |
| ·含 GSTP1-l105V 质粒农杆菌感受态的制备 | 第37页 |
| ·CYP2A6 质粒的提取 | 第37页 |
| ·冻融法转化 | 第37页 |
| ·GSTP1-l105V 质粒向含 CYP2A6 质粒农杆菌的转化 | 第37-38页 |
| ·含 CYP2A6 质粒农杆菌感受态的制备 | 第37页 |
| ·GSTP1-l105V 质粒的提取 | 第37页 |
| ·冻融法转化 | 第37-38页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定、保存 | 第38页 |
| ·农杆菌转化子的获得及一次鉴定 | 第38页 |
| ·目的片段 PCR 扩增及二次鉴定 | 第38页 |
| ·农杆菌转化子的保存 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-41页 |
| ·质粒 DNA 的提取后电泳结果 | 第38-39页 |
| ·PCR 扩增产物电泳结果 | 第39-40页 |
| ·重组质粒 pBI121- GSTP1-l105V、pBI121- CYP2A6 的鉴定结果 | 第40页 |
| ·含 GSTP1-l105V 和 CYP2A6 双质粒农杆菌的鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·本章注意点和补充 | 第41-47页 |
| ·农杆菌介导转化法的特点 | 第41-42页 |
| ·pBI121 载体要点 | 第42页 |
| ·质粒提取过程注意点 | 第42-43页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳注意点 | 第43页 |
| ·目的片段胶回收注意点 | 第43页 |
| ·引物设计步骤 | 第43-45页 |
| ·农杆菌转化注意点 | 第45页 |
| ·农杆菌双质粒转化率影响因素 | 第45-47页 |
| 第三章 紫花苜蓿组织培养条件优化 | 第47-54页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·仪器及设备来源 | 第47页 |
| ·主要试剂来源及溶液配方 | 第47-48页 |
| ·主要试剂来源 | 第47-48页 |
| ·主要溶液配方 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·种子的处理 | 第48页 |
| ·愈伤组织诱导与分化中激素浓度的探究 | 第48页 |
| ·外植体对 Kan、Amp、Rif、头孢克肟的耐受力试验 | 第48页 |
| ·继代培养中激素浓度的探究 | 第48-49页 |
| ·生根培养培养中激素浓度的探究 | 第49页 |
| ·外植体种类对愈伤组织、芽和根形成的影响 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-53页 |
| ·种子处理方式对无菌苗生长的影响 | 第49-50页 |
| ·Kan 浓度对愈伤组织的影响 | 第50页 |
| ·Rif 浓度对愈伤组织的影响 | 第50-51页 |
| ·Amp 浓度对愈伤组织的影响 | 第51页 |
| ·Cef 浓度对愈伤组织的影响 | 第51-52页 |
| ·不同激素浓度及配比对愈伤组织、芽以及根形成的影响 | 第52-53页 |
| ·外植体种类对愈伤组织、芽和根形成的影响结果 | 第53页 |
| ·本章注意点及补充 | 第53-54页 |
| 第四章 农杆菌介导法将 GSTP1-l105V 和 CYP2A6 基因导入紫花苜蓿 | 第54-60页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·仪器与设备 | 第54页 |
| ·主要试剂和溶液配方 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·种子的处理 | 第55页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第55页 |
| ·下胚轴的预培养 | 第55页 |
| ·浸染与共培养 | 第55-56页 |
| ·浸染菌液浓度和时间大致范围的确定 | 第55页 |
| ·共培养时间大致范围的确定 | 第55-56页 |
| ·相关因素实验水平的设计 | 第56页 |
| ·Amp（Cef）抑菌实验 | 第56页 |
| ·愈伤组织的脱菌 | 第56页 |
| ·愈伤组织的继代和生芽 | 第56页 |
| ·幼芽的生根 | 第56-57页 |
| ·实验结果 | 第57-59页 |
| ·农杆菌生长情况 | 第57页 |
| ·表 4-2 实验结果 | 第57页 |
| ·Amp（Cef）抑菌实验结果 | 第57-58页 |
| ·愈伤组织的继代和生芽 | 第58-59页 |
| ·幼芽的生根 | 第59页 |
| ·本章注意点和补充 | 第59-60页 |
| 第五章 转基因植株的分子检测及功能鉴定 | 第60-72页 |
| ·实验材料 | 第60-62页 |
| ·仪器及设备 | 第60页 |
| ·主要试剂来源及溶液配方 | 第60-61页 |
| ·主要试剂来源 | 第60页 |
| ·溶液配方 | 第60-61页 |
| ·引物（大连宝生物合成） | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-65页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第62-64页 |
| ·转基因植株基因组 DNA 提取 | 第62页 |
| ·PCR 检测 | 第62-63页 |
| ·转基因植株 RNA 的提取 | 第63-64页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第64页 |
| ·转基因植株的耐受性实验 | 第64-65页 |
| ·转基因植株对重金属的耐受实验 | 第64页 |
| ·转基因植株对有机物的耐受实验 | 第64-65页 |
| ·转基因植株对重金属和有机复合污染物的耐受实验 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-69页 |
| ·转基因植株基因组 DNA 的 PCR 检测结果 | 第65-66页 |
| ·转基因紫花苜蓿总 RNA 的提取结果 | 第66页 |
| ·RT-PCR 检测结果 | 第66-68页 |
| ·转基因植株对重金属和有机物的耐受实验结果 | 第68-69页 |
| ·转基因植株对重金属的耐受实验结果 | 第68页 |
| ·转基因植株对有机物的耐受实验结果 | 第68-69页 |
| ·转基因植株对重金属和有机复合污染物的耐受实验结果 | 第69页 |
| ·本章注意点和补充 | 第69-72页 |
| ·外源基因的整合 | 第69-70页 |
| ·GSTP1-l105V 基因和 CYP2A6 基因在紫花苜蓿中的表达 | 第70页 |
| ·外源基因在植物中表达存在的问题 | 第70页 |
| ·RNA 提取注意事项 | 第70-71页 |
| ·RT-PCR 操作注意事项 | 第71-72页 |
| 全文结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第80-81页 |
