| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1. 文献综述 | 第12-18页 |
| ·逆境胁迫的影响与危害 | 第12页 |
| ·植物的抗逆性 | 第12-13页 |
| ·植物抗逆途径概述 | 第12-13页 |
| ·抗性鉴定指标归类 | 第13页 |
| ·形态指标 | 第13页 |
| ·生理与生化指标 | 第13页 |
| ·逆境胁迫下植物的信号传导 | 第13-14页 |
| ·ABA信号传导研究进展 | 第14-18页 |
| ·ABA受体的发现及功能研究 | 第14-15页 |
| ·ABA信号传导途径组件及逆境胁迫应答因子的发现和功能研究 | 第15-18页 |
| 2. 材料与方法 | 第18-33页 |
| ·试验材料 | 第18页 |
| ·供试材料 | 第18页 |
| ·试验所用到的菌株、载体 | 第18页 |
| ·试验所用到的分子生物学试剂 | 第18页 |
| ·总DNA的提取及纯化 | 第18-19页 |
| ·总RNA的提取及反转录 | 第19-20页 |
| ·小麦、拟南芥、水稻叶片总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·RNA的质量及纯度检测 | 第19页 |
| ·分光光度计RNA纯度检测 | 第19-20页 |
| ·CDNA第一条链的合成 | 第20页 |
| ·小麦、拟南芥、粳稻RARF基因的克隆 | 第20-22页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第20页 |
| ·PCR扩增产物的检测和回收纯化 | 第20-21页 |
| ·回收产物与PMD-18T载体的连接与转化 | 第21-22页 |
| ·TARARF基因组织特异性表达分析 | 第22-23页 |
| ·TARARF基因组织特异性半定量分析 | 第22页 |
| ·TARARF基因组织特异性荧光定量分析 | 第22-23页 |
| ·苗期T-RARF基因ABA应答表达分析 | 第23页 |
| ·植物遗传转化载体的构建和转化 | 第23-26页 |
| ·超量表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·遗传转化 | 第24-26页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备转化 | 第24-25页 |
| ·水稻基本培养基 | 第25页 |
| ·根癌农杆菌介导水稻转化 | 第25-26页 |
| ·种子消毒和愈伤组织的诱导 | 第25-26页 |
| ·农杆菌介导水稻转化 | 第26页 |
| ·转基因植株的初步鉴定 | 第26页 |
| ·转基因水稻DNA的提取 | 第26页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第26页 |
| ·外源目的基因TARARF-V1、TARARF-V2的表达分析 | 第26页 |
| ·转基因植株的ABA敏感性实验 | 第26页 |
| ·转基因植株苗期抗旱性分析 | 第26-27页 |
| ·转基因植株离体条件下失水速率统计 | 第27页 |
| ·丙二醛(MDA)含量的测定 | 第27页 |
| ·酵母双杂交系统筛选TARARF基因相互作用基因 | 第27-32页 |
| ·小麦T-RARF基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·小麦T-RARF基因片段的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增产物的检测和回收纯化 | 第28页 |
| ·回收产物与PMD18-T载体的连接与转化 | 第28页 |
| ·重组克隆的验证及序列测定 | 第28页 |
| ·诱饵蛋白载体的构建 | 第28-29页 |
| ·酵母菌株的表型鉴定 | 第29页 |
| ·诱饵载体的自激活检测 | 第29-30页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第29-30页 |
| ·酵母感受态的转化 | 第30页 |
| ·诱饵质粒和文库质粒的大规模共转化 | 第30页 |
| ·分析和确认阳性克隆 | 第30-32页 |
| ·实验所用引物及序列 | 第32-33页 |
| 3. 结果与分析 | 第33-54页 |
| ·小麦TARARF基因克隆及序列分析 | 第33-35页 |
| ·RARF基因转录本存在剪切变异体 | 第35-39页 |
| ·RARF剪切变异体编码蛋白结构分析 | 第39-41页 |
| ·不同小麦品种中T-RARF基因组织特异性表达 | 第41-42页 |
| ·苗期TARARF基因的ABA应答分析 | 第42-44页 |
| ·过表达载体的构建 | 第44页 |
| ·转TARARF-V1、TARARF-V2水稻获得 | 第44-46页 |
| ·根癌农杆菌介导水稻转化 | 第44-45页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·TARARF-V1、TARARF-V2超量表达转基因植株抗逆性分析 | 第46-49页 |
| ·转基因植株ABA敏感性分析 | 第46-47页 |
| ·转基因株系苗期抗旱性分析 | 第47-49页 |
| ·转基因株系苗期失水速率分析 | 第49页 |
| ·T-RARF基因酵母双杂交诱饵表达载体的构建、鉴定 | 第49-51页 |
| ·重组质粒PMDL8-TARARF的鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组诱饵表达质粒PGBKT7-T-RARF的鉴定 | 第50-51页 |
| ·酵母AHL09菌株表型的验证 | 第51页 |
| ·组诱饵表达质粒PGBKT7-TARARF的自激活检测 | 第51-52页 |
| ·DNA文库的筛选与相互作用蛋白的确认 | 第52-54页 |
| ·CDNA文库的筛选结果 | 第52页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·阳性克隆的质粒提取 | 第53页 |
| ·阳性克隆测序获得插入片段序列及信息学分析结果 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| ·TARARF基因选择性剪接机制探讨 | 第54页 |
| ·TARARF基因在水稻抗逆性提高作用机理探讨 | 第54页 |
| ·利用酵母双杂交系统进行文库筛选的研究讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| ABSTRACT | 第63-64页 |
