| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-15页 |
| ·乳酸脱氢酶简介 | 第9页 |
| ·乳酸脱氢酶的研究背景 | 第9-11页 |
| ·乳酸脱氢酶的催化特性 | 第9页 |
| ·乳酸脱氢酶的来源 | 第9-10页 |
| ·LDH 的基因工程研究 | 第10页 |
| ·乳酸脱氢酶的实际应用价值 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌表达体系 | 第11-13页 |
| ·大肠杆菌表达载体 | 第12页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位 | 第12-13页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第13-14页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达的影响因素 | 第14页 |
| ·课题研究的意义与主要研究内容 | 第14-15页 |
| ·研究意义 | 第14页 |
| ·研究内容 | 第14-15页 |
| 第2章 乳酸脱氢酶基因克隆、原核诱导表达及功能研究 | 第15-37页 |
| ·实验材料和试剂 | 第15页 |
| ·菌株及载体 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·实验方法 | 第15-23页 |
| ·植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）基因组DNA 的提取 | 第15-16页 |
| ·ldhL 基因扩增 | 第16页 |
| ·ldhL 的纯化回收 | 第16-18页 |
| ·克隆载体pT-ldh 的构建 | 第18-20页 |
| ·pET-ldh 原核表达载体的构建 | 第20页 |
| ·在E.coli 中的诱导表达重组乳酸脱氢酶基因 | 第20-21页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第21-22页 |
| ·粗酶液的制备 | 第22页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第22-23页 |
| ·LDH 酶活测定 | 第23页 |
| ·结果与讨论 | 第23-36页 |
| ·ldh 基因克隆 | 第23-24页 |
| ·pT-ldh 克隆载体的构建与鉴定 | 第24-27页 |
| ·原核表达载体pET-ldh 的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第28页 |
| ·粗酶液活性测定 | 第28-29页 |
| ·诱导培养条件的优化 | 第29-34页 |
| ·LDH 酶性质参数的测定 | 第34-36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 乳酸脱氢酶在毕赤酵母胞内诱导表达 | 第37-50页 |
| ·材料与仪器 | 第37页 |
| ·菌株及载体 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-43页 |
| ·ldh 的基因克隆 | 第37-38页 |
| ·毕赤酵母穿梭载体pPICZ-ldh 的构建 | 第38页 |
| ·毕赤酵母氯化锂转化 | 第38-41页 |
| ·毕赤酵母基因组DNA 的提取 | 第41页 |
| ·重组酵母的初步鉴定 | 第41页 |
| ·pPICZ-ldh 毕赤酵母重组子的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·重组酵母的参数测定 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-49页 |
| ·ldh 基因克隆结果 | 第43-44页 |
| ·重组载体pPICZ-ldh 的鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组穿梭载体酵母转化结果 | 第46页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·LDH 蛋白在毕赤酵母中的SDS-PAGE 鉴定 | 第47-48页 |
| ·LDH 蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第4章 乳酸脱氢酶在毕赤酵母中组成型分泌表达 | 第50-60页 |
| ·材料与仪器 | 第50页 |
| ·菌株及载体 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-53页 |
| ·ldh 的基因克隆 | 第50页 |
| ·毕赤酵母穿梭载体pGAPZ-ldh 的构建 | 第50页 |
| ·毕赤酵母电转化 | 第50-53页 |
| ·重组酵母的初步鉴定 | 第53页 |
| ·pGAPZ-ldh 毕赤酵母重组子的表达及参数测定 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-58页 |
| ·ldh 基因克隆结果 | 第53-54页 |
| ·重组载体pGAPZ-ldh 的鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组穿梭载体酵母转化结果 | 第55-56页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR 鉴定 | 第56-57页 |
| ·LDH 蛋白在毕赤酵母中的SDS-PAGE 鉴定 | 第57页 |
| ·LDH 蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
