| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-22页 |
| ·α-L-鼠李糖苷酶 | 第13-19页 |
| ·α-L-鼠李糖苷酶的来源 | 第13页 |
| ·α-L-鼠李糖苷酶的性质及应用 | 第13-14页 |
| ·α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆研究 | 第14-16页 |
| ·α-L-鼠李糖苷酶基因的表达研究 | 第16-18页 |
| ·α-L-鼠李糖苷酶的结构生物学研究 | 第18-19页 |
| ·黑曲霉 | 第19页 |
| ·研究目的与意义 | 第19-20页 |
| ·研究内容 | 第20-22页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆及分析 | 第20页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶基因的表达差异分析 | 第20页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶基因的原核表达 | 第20-21页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶基因的真核表达 | 第21-22页 |
| 第2章 黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆及分析 | 第22-41页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·仪器设备 | 第23-24页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 菌株的培养 | 第25页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·测序 | 第27-28页 |
| ·序列分析 | 第28-29页 |
| ·结果和分析 | 第29-40页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 总 RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶 cDNA 的克隆 | 第30-34页 |
| ·序列分析 | 第34-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第3章 黑曲霉 JMU-TS528 中α-L-鼠李糖苷酶基因的表达差异分析 | 第41-53页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌种 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第41-42页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第42页 |
| ·引物 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 菌株的活化 | 第43页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 菌株液态发酵α-L-鼠李糖苷酶酶活力的鉴定 | 第43页 |
| ·不同碳源对黑曲霉 JMU-TS528 菌株分泌α-L-鼠李糖苷酶的影响 | 第43页 |
| ·酶活的测定 | 第43-44页 |
| ·生物量的测定 | 第44页 |
| ·发酵液残糖的测定 | 第44-45页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 总 RNA 的提取 | 第45页 |
| ·cDNA 链的合成 | 第45页 |
| ·实时定量 PCR 检测基因的表达量 | 第45-46页 |
| ·结果和分析 | 第46-51页 |
| ·不同碳源对黑曲霉 JMU-TS528 菌株分泌 α-L-鼠李糖苷酶的影响 | 第46-47页 |
| ·添加葡萄糖对黑曲霉 JMU-TS528 产 α-L-鼠李糖苷酶的影响 | 第47-48页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 总 RNA 的提取与检测 | 第48页 |
| ·引物质量的检测 | 第48页 |
| ·标准曲线的构建 | 第48-49页 |
| ·黑曲霉 JMU-TS528 中 L-rha 的表达情况 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第4章 黑曲霉 JMU-TS528 中 α-L-鼠李糖苷酶基因的原核表达 | 第53-60页 |
| ·材料 | 第53-55页 |
| ·菌株及质粒 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要培养基及溶液的配制 | 第54页 |
| ·仪器设备 | 第54页 |
| ·引物 | 第54-55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·pET-rha 的构建 | 第55-56页 |
| ·原核表达和不溶性表达产物的纯化 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第56页 |
| ·表达条件的优化 | 第56页 |
| ·酶活测定 | 第56-57页 |
| ·结果和分析 | 第57-59页 |
| ·pET-rha 的构建 | 第57页 |
| ·表达产物的检测 | 第57-58页 |
| ·诱导条件的优化 | 第58页 |
| ·不溶性表达产物的纯化 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第5章 黑曲霉 JMU-TS528 中 α-L-鼠李糖苷酶基因的真核表达 | 第60-74页 |
| ·材料 | 第60-62页 |
| ·菌株及质粒 | 第60页 |
| ·主要试剂溶液及培养基的配制 | 第60-61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·引物 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·pPIC9K-rha 的构建 | 第62-63页 |
| ·毕赤酵母 GS115 感受态细胞的制备 | 第63页 |
| ·电转化 | 第63页 |
| ·筛选及鉴定 | 第63页 |
| ·重组 α-L-鼠李糖苷酶的诱导表达 | 第63-64页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第64页 |
| ·重组酶的分离纯化及质谱鉴定 | 第64页 |
| ·重组 α-L-鼠李糖苷酶酶学性质的测定 | 第64-65页 |
| ·结果和分析 | 第65-73页 |
| ·pPIC9K-rha 的构建 | 第65-66页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第66-67页 |
| ·表达产物的酶活检测 | 第67-68页 |
| ·表达产物的电泳检测 | 第68页 |
| ·重组酶的分离纯化及质谱鉴定 | 第68-69页 |
| ·重组 α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质 | 第69-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第6章 结论与展望 | 第74-76页 |
| ·结论 | 第74-75页 |
| ·展望 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第84页 |
