| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-31页 |
| ·14-3-3 简介 | 第18-27页 |
| ·14-3-3 的发现和命名 | 第18页 |
| ·14-3-3 的结构 | 第18-19页 |
| ·14-3-3 的分类 | 第19页 |
| ·14-3-3 的作用 | 第19-21页 |
| ·14-3-3 参与植物生长发育 | 第21-27页 |
| ·BR的研究进展 | 第27-28页 |
| ·油菜素内酯的发现 | 第27页 |
| ·油菜素内酯的生理作用 | 第27页 |
| ·BR信号通路的相关研究 | 第27-28页 |
| ·棉花纤维的发育 | 第28-29页 |
| ·棉纤维的发育过程 | 第28-29页 |
| ·BR影响棉花纤维的发育 | 第29页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第29-31页 |
| 第二章 Gh14-3-3基因的克隆鉴定及表达分析 | 第31-50页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·棉花材料 | 第31页 |
| ·棉花Gh14-3-3基因的获得 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第31页 |
| ·常用缓冲液和储存液 | 第31-32页 |
| ·常用培养基 | 第32页 |
| ·提取棉花各组织RNA的试剂及实验用品的处理 | 第32页 |
| ·转化棉花常用培养基 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·Gh14-3-3s cDNA和蛋白质序列分析 | 第33页 |
| ·棉花各组织材料的收取 | 第33页 |
| ·棉花纤维材料的离体胚培养和激素处理 | 第33页 |
| ·棉花基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·棉花各组织RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第35-41页 |
| ·结果 | 第41-47页 |
| ·Gh14-3-3h的分离鉴定 | 第41-42页 |
| ·Gh14-3-3h与其它棉花14-3-3的蛋白比对 | 第42-43页 |
| ·Gh14-3-3h与其它14-3-3的进化树分析 | 第43页 |
| ·Gh14-3-3h基因的全长的克隆鉴定 | 第43-44页 |
| ·Gh14-3-3h在棉花各组织及纤维发育时期的表达 | 第44-45页 |
| ·Gh14-3-3h在徐州142和无绒无絮棉纤维中的表达 | 第45-46页 |
| ·Gh14-3-3h表达受BL的诱导 | 第46页 |
| ·Gh14-3-3h蛋白的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 Gh14-3-3互作蛋白的筛选及相互作用验证 | 第50-66页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·质粒 | 第50页 |
| ·棉花纤维酵母双杂交cDNA文库 | 第50页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第50页 |
| ·常用缓冲液 | 第50页 |
| ·常用培养基 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-55页 |
| ·构建诱饵质粒 | 第51-52页 |
| ·pGBKT7-Gh14-3-3重组质粒转化酵母细胞 | 第52页 |
| ·诱饵蛋白自激活检测 | 第52-53页 |
| ·诱饵蛋白毒性检测 | 第53页 |
| ·酵母细胞接合筛选互作蛋白 | 第53-54页 |
| ·鉴定阳性克隆 | 第54页 |
| ·互作蛋白的分析 | 第54-55页 |
| ·结果 | 第55-64页 |
| ·pGBKT7-Gh14-3-3载体的构建 | 第55页 |
| ·诱饵质粒转化酵母及其蛋白自激活检测结果 | 第55-56页 |
| ·诱饵蛋白的毒性检测 | 第56-57页 |
| ·Gh14-3-3f/g/h的互作蛋白筛选鉴定 | 第57-58页 |
| ·筛选得到的阳性克隆回转验证 | 第58页 |
| ·筛选得到的互作蛋白序列测定及分析 | 第58-62页 |
| ·Gh14-3-3h与其它5个Gh14-3-3蛋白间的相互作用 | 第62页 |
| ·互作蛋白选择性的与Gh14-3-3蛋白相互作用 | 第62-63页 |
| ·Gh14-3-3h通过保守的1ys位点与靶蛋白相互作用 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 GhBZR1的分离鉴定及其蛋白质相互作用分析 | 第66-91页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·植物材料和菌株 | 第66页 |
| ·其它材料 | 第66页 |
| ·常用试剂和工具酶 | 第66页 |
| ·常用缓冲液 | 第66页 |
| ·常用培养基 | 第66页 |
| ·原核表达蛋白及蛋白纯化所用试剂及缓冲液 | 第66页 |
| ·蛋白电泳所需试剂及缓冲液 | 第66-67页 |
| ·Western-blot所用试剂和缓冲液 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-75页 |
| ·GhBZR1和GhBIN2基因RT-PCR引物序列 | 第67页 |
| ·GhBZR1和GhBZR1PL过量表达拟南芥 | 第67-70页 |
| ·GhBZR1：eGFP在烟草叶肉细胞中的表达 | 第70页 |
| ·酵母双杂交验证GhBZR1和GhBIN2的相互作用 | 第70-71页 |
| ·原核表达和纯化蛋白 | 第71-74页 |
| ·GhBZR1抗体的制备 | 第74页 |
| ·Western-blot分析 | 第74页 |
| ·His-GhBIN2体外磷酸化MBP-GhBZR1蛋白 | 第74-75页 |
| ·pull-down实验验证体外磷酸化的GhBZR1与Gh14-3-3的相互作用 | 第75页 |
| ·双分子荧光互补实验验证GhBZR1和Gh14-3-3L的相互作用 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-89页 |
| ·GhBZR1的分离及进化系统分析 | 第75-76页 |
| ·BL影响GhBZR1蛋白亚细胞定位 | 第76-78页 |
| ·GhBZR1蛋白的纯化及抗体的制备 | 第78页 |
| ·GhBZR1与GhBIN2蛋白间的相互作用 | 第78-82页 |
| ·GhBZR1与Gh14-3-3蛋白的相互作用 | 第82-85页 |
| ·在拟南芥中过量表达GhBZRl的表型分析 | 第85-89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| 第五章 GhMYB73克隆鉴定及其蛋白质相互作用分析 | 第91-102页 |
| ·实验材料 | 第91页 |
| ·植物材料和菌株 | 第91页 |
| ·其它材料 | 第91页 |
| ·工具酶 | 第91页 |
| ·常用缓冲液 | 第91页 |
| ·常用培养基 | 第91页 |
| ·原核表达蛋白及蛋白纯化所用试剂及缓冲液 | 第91页 |
| ·蛋白电泳所需试剂及缓冲液 | 第91页 |
| ·Western-blot所用试剂和缓冲液 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-92页 |
| ·原核蛋白表达,纯化和western-blot | 第91页 |
| ·His-GhBIN2体外磷酸化GST-GhMYB73蛋白 | 第91-92页 |
| ·pull-down实验验证体外磷酸化的GhMYB73与Gh14-3-3的相互作用 | 第92页 |
| ·结果 | 第92-99页 |
| ·GhMYB73基因的克隆和其进化树分析 | 第92-93页 |
| ·GhMYB73组织表达情况 | 第93-94页 |
| ·BL诱导GhMYB73的表达 | 第94页 |
| ·GhMYB73的亚细胞定位 | 第94-95页 |
| ·GhMYB73与AtBES1的相互作用 | 第95页 |
| ·GhMYB73与GhBIN2的相互作用 | 第95-97页 |
| ·GhBIN2磷酸化GhMYB促进其与Gh14-3-3e的相互作用 | 第97页 |
| ·GhMYB73过量表达拟南芥mRNA水平上的鉴定 | 第97-98页 |
| ·GhMYB73过量表达拟南芥表型的初步分析 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| 第六章 Gh14-3-3蛋白在棉花纤维发育中的功能研究 | 第102-124页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·植物材料 | 第102页 |
| ·菌株 | 第102页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第102页 |
| ·常用缓冲液及储存液 | 第102页 |
| ·常用培养基 | 第102页 |
| ·转化棉花常用培养基 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-104页 |
| ·引物设计 | 第102-104页 |
| ·拟南芥转化 | 第104页 |
| ·拟南芥基因组DNA提取 | 第104页 |
| ·拟南芥RNA提取,纯化及反转录 | 第104页 |
| ·转化棉花外植体 | 第104页 |
| ·棉花基因组DNA的提取 | 第104页 |
| ·结果 | 第104-121页 |
| ·Gh14-3-3h过量表达拟南芥mRNA水平检测 | 第104-105页 |
| ·Gh14-3-3h过量表达拟南芥表型分析 | 第105-106页 |
| ·Gh14-3-3h过量表达拟南芥标记基因的表达分析 | 第106-107页 |
| ·Gh14-3-3hRNAi载体转化棉花 | 第107-108页 |
| ·Gh14-3-3s转基因棉花的分析 | 第108-121页 |
| ·讨论 | 第121-124页 |
| 结论 | 第124-126页 |
| 本论文的主要创新点 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-137页 |
| 附录 | 第137-139页 |
| 博士期间撰写和发表的学术论文 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
