| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 縮略语表(Abbreviation) | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-49页 |
| ·副猪嗜血杆菌研究进展 | 第16-29页 |
| ·副猪嗜血杆菌病概述 | 第16-17页 |
| ·副猪嗜血杆菌的致病机理 | 第17-21页 |
| ·HPS潜在致病因子的挖掘与鉴定 | 第21-28页 |
| ·小结与展望 | 第28-29页 |
| ·细菌性脑膜炎研究进展 | 第29-49页 |
| ·细菌性脑膜炎与血脑屏障 | 第29-33页 |
| ·病原菌穿过BBB的基本要素 | 第33-41页 |
| ·脑脊液细胞增多及BBB功能的损伤 | 第41-43页 |
| ·神经元损伤以及细菌性脑膜炎的临床结果与危害 | 第43-47页 |
| ·小结与展望 | 第47-49页 |
| 第2章 副猪嗜血杆菌潜在毒力因子的筛选及capD基因的功能研究 | 第49-126页 |
| ·研究目的与意义 | 第49-50页 |
| ·实验材料 | 第50-56页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第50-51页 |
| ·培养基及抗生素溶液的配制 | 第51-52页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第52-55页 |
| ·主要实验器材 | 第55页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·引物 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-83页 |
| ·HPS菌株的复苏和传代培养 | 第56-57页 |
| ·HPS血清5型菌株SH0165和4型菌株7140的攻毒试验 | 第57页 |
| ·SH0165和7140菌株细菌基因组的提取 | 第57-58页 |
| ·抑制消减杂交(Suppression Sub.active Hybridization,SSH) | 第58-64页 |
| ·消减片段文库的构建和鉴定 | 第64-65页 |
| ·Dot-Blot复筛阳性克隆 | 第65-66页 |
| ·PCR检测差异片段在HPS参考菌株和地方分离株中的流行 | 第66页 |
| ·多糖合成基因capD缺失重组质粒的构建 | 第66-68页 |
| ·capD基因缺失株的筛选 | 第68-71页 |
| ·capD缺失株的PCR鉴定 | 第71页 |
| ·capD缺失株的Southern鉴定 | 第71-74页 |
| ·capD缺失株的RT-PCR鉴定 | 第74-76页 |
| ·CapD蛋白的原核表达及纯化 | 第76-78页 |
| ·CapD蛋白免疫血清的制备 | 第78-79页 |
| ·capD缺失的Western Blotting鉴定 | 第79-80页 |
| ·capD缺失的遗传稳定性检测 | 第80页 |
| ·capD互补菌株的构建 | 第80页 |
| ·野生、缺失和互补三者菌落形态,生长曲线及生化特性比较 | 第80-81页 |
| ·野生株、缺失株和互补菌株三者动物感染实验 | 第81页 |
| ·野生株、缺失株和互补菌株的血清杀菌实验 | 第81-82页 |
| ·野生株和缺失株表面结构的电镜观察 | 第82页 |
| ·野生株和缺失株的蛋白质组双向电泳 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-119页 |
| ·HPS菌株SH0165和7140的毒力比较 | 第83-85页 |
| ·SH0165和7140基因组消减杂交 | 第85-88页 |
| ·消减文库的构建和筛选 | 第88-90页 |
| ·特异性消减片段的测序分析 | 第90-93页 |
| ·消减片段在HPS参考菌株和地方分离株中的流行情况 | 第93-98页 |
| ·capD重组质粒的构建与鉴定 | 第98-100页 |
| ·SH0165 △capD缺失株的筛选与鉴定 | 第100-102页 |
| ·缺失株△capD的DNA、RNA和蛋白水平的验证 | 第102-105页 |
| ·互补菌株C-capD的构建及验证 | 第105-106页 |
| ·野生株、缺失株和互补菌株的生物学特性 | 第106-109页 |
| ·野生株、缺失株和互补菌株三者致病性的比较 | 第109-114页 |
| ·野生株、缺失株和互补菌株三者的血清抗性 | 第114-115页 |
| ·野生株和缺失株表面荚膜结构的超微切片观察 | 第115页 |
| ·capD基因缺失前后菌株蛋白质水平上的差异 | 第115-119页 |
| ·讨论 | 第119-124页 |
| ·抑制消减杂交筛选的HPS潜在致病相关因子 | 第119-121页 |
| ·消减片段在不同背景HPS菌株中的流行情况分析 | 第121-122页 |
| ·capD基因功能的初步揭示 | 第122-124页 |
| ·CapD蛋白与菌株其他蛋白之间的潜在联系 | 第124页 |
| ·小结与展望 | 第124-126页 |
| 第3章 一磷酸鞘氨醇(S1P)和表皮生长因子受体(EGFR)在细菌性脑膜炎中的作用研究 | 第126-168页 |
| ·研究背景 | 第126-127页 |
| ·研究目的与意义 | 第127页 |
| ·实验材料 | 第127-131页 |
| ·菌株、细胞及质粒 | 第127-128页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第128-129页 |
| ·培养基及相关溶液的配制 | 第129-130页 |
| ·主要实验器材 | 第130页 |
| ·实验动物 | 第130页 |
| ·引物 | 第130-131页 |
| ·实验方法 | 第131-137页 |
| ·细菌的粘附侵入实验 | 第131-132页 |
| ·HBMEC细胞的转染 | 第132-133页 |
| ·免疫沉淀 | 第133-134页 |
| ·Western Blotting | 第134页 |
| ·荧光定量PCR | 第134-137页 |
| ·小鼠感染实验 | 第137页 |
| ·统计学分析 | 第137页 |
| ·结果与分析 | 第137-159页 |
| ·EGFR在致脑膜炎E.coli菌株突破血脑屏障中的作用 | 第137-142页 |
| ·激活EGFR的E.coli菌株致病因子的鉴定 | 第142-143页 |
| ·S1P和SphK2在致脑膜炎E.coli菌株突破BBB过程中的作用 | 第143-146页 |
| ·致脑膜炎菌株RS218侵入HBMEC过程中S1P受体的鉴定 | 第146-147页 |
| ·E.coli菌体蛋白OmpA、FimH和N1pI对SphK2的激活作用 | 第147-148页 |
| ·致脑膜炎E.coli菌株通过SphK2/S1P/S1P_2信号途径激活EGFR | 第148-150页 |
| ·致脑膜炎E.coli菌株对EGFR的激活通过其特异性配体HB-EGF介导 | 第150-154页 |
| ·致脑膜炎E.coli菌株感染HBMEC后引起EGFR与c-Src互作 | 第154-155页 |
| ·c-Src对RS218菌株侵入HBMEC细胞的影响 | 第155-156页 |
| ·SphK2/S1P/S1P_2-EGFR信号通路的激活导致后续c-Src的激活 | 第156-158页 |
| ·ERM蛋白的激活受到SphK2/S1P/S1P_2-EGFR信号通路的调控 | 第158-159页 |
| ·讨论 | 第159-167页 |
| ·EGFR在脑血管内皮细胞(BMEC)的表达 | 第159-160页 |
| ·EGFR在不同病原菌感染过程中的作用机制 | 第160-161页 |
| ·S1P在血管细胞功能中的作用及其对病原菌突破BBB的影响 | 第161-162页 |
| ·S1P受体作用的探讨 | 第162-163页 |
| ·S1P信号途径激活EGFR的分子机制 | 第163-165页 |
| ·c-Src在病原菌感染过程中的作用 | 第165页 |
| ·ERM蛋白家族与病原菌对宿主细胞侵入的关系 | 第165-167页 |
| ·小结与展望 | 第167-168页 |
| 结论 | 第168-169页 |
| 参考文献 | 第169-190页 |
| 文章发表 | 第190-191页 |
| 致谢 | 第191-192页 |
