| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-23页 |
| ·抗菌肽 | 第13-20页 |
| ·抗菌肽的种类 | 第14-18页 |
| ·抗菌肽主要作用 | 第18-20页 |
| ·抗菌肽表达研究进展 | 第20-21页 |
| ·抗菌肽的开发策略 | 第20页 |
| ·抗菌肽的原核表达系统 | 第20-21页 |
| ·抗菌肽的真核表达系统 | 第21页 |
| ·本文的主要内容和研究意义 | 第21-23页 |
| ·主要内容 | 第21-22页 |
| ·研究意义 | 第22-23页 |
| 第二章 牛乳铁蛋白肽LFCINB结构域在酿酒酵母表达体系构建 | 第23-52页 |
| 引论 | 第23-24页 |
| ·材料 | 第24-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第25页 |
| ·主要溶液及常用实验试剂配置 | 第25-28页 |
| ·方法 | 第28-39页 |
| ·基因和引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| ·LfcinB基因PCR扩增 | 第29页 |
| ·LfcinB基因PCR产物胶回收 | 第29-30页 |
| ·分泌表达型重组质粒pYES2-α-LfcinB构建 | 第30-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pYES2-α-LfcinB提取 | 第33-34页 |
| ·酿酒酵母INVSc1感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pYES2-α-LfcinB转化酿酒酵母INVSc1 | 第35页 |
| ·工程菌表达LfcinB结构域 | 第35-36页 |
| ·牛乳铁蛋白肽LfcinB Tricine-SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·Lowry法测蛋白浓度 | 第37-38页 |
| ·LfcinB结构域抑菌活性检测 | 第38页 |
| ·LfcinB诱导条件优化 | 第38-39页 |
| ·LfcinB稳定性研究 | 第39页 |
| ·不同种类的盐离子对LfcinB抑菌活性影响 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-50页 |
| ·抗菌肽LfcinB基因PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·分泌表达型重组质粒pYES2-α-LfcinB构建及鉴定 | 第40-41页 |
| ·牛乳铁蛋白肽LfcinB Tricine-SDS-PAGE | 第41-42页 |
| ·牛乳铁蛋白肽LfcinB抑菌活性检测 | 第42-43页 |
| ·牛乳铁蛋白肽LfcinB诱导条件优化 | 第43-44页 |
| ·LfcinB稳定性研究 | 第44-46页 |
| ·酿酒酵母工程菌OD600值监测结果 | 第46页 |
| ·不同盐离子对LfcinB抑菌活性影响 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 颗粒裂解肽G13在酿酒酵母中表达条件的优化及性质研究 | 第52-64页 |
| 引论 | 第52-53页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第53页 |
| ·菌株 | 第53页 |
| ·常用溶液及试剂配置 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·pYES2-α-G13质粒构建 | 第54页 |
| ·酿酒酵母INVSc1工程菌培养及诱导表达 | 第54页 |
| ·G13结构域抑菌活性检测 | 第54-55页 |
| ·G13 Tricine-SDS-PAGE分析 | 第55页 |
| ·G13诱导条件优化 | 第55页 |
| ·G13性质研究 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-63页 |
| ·颗粒裂解肽G13抑菌活性检测 | 第56页 |
| ·颗粒裂解肽G13 Tricine-SDS-PAGE检测 | 第56-57页 |
| ·G13表达的诱导条件优化 | 第57-61页 |
| ·G13性质研究 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 杂合肽牛乳铁蛋白肽-颗粒裂解肽G13在酿酒酵母表达体系的构建及性质研究 | 第64-76页 |
| 引论 | 第64-65页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-71页 |
| ·基因和引物的设计与合成 | 第65-66页 |
| ·LfcinB基因的PCR扩增 | 第66页 |
| ·G13基因的PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·LfcinB基因和G13基因PCR产物回收 | 第67页 |
| ·胶回收产物的磷酸化和平末端连接 | 第67-68页 |
| ·LfcinB-G13基因扩增 | 第68页 |
| ·重组质粒和LG双酶切 | 第68-69页 |
| ·双酶切质粒和LG连接 | 第69页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化 | 第69页 |
| ·重组质粒pYES2-α-LG提取 | 第69-70页 |
| ·重组质粒pYES2-α-LG转化酿酒酵母INVSc1 | 第70页 |
| ·工程菌表达LG结构域 | 第70页 |
| ·LG的Tricine-SDS-PAGE分析 | 第70-71页 |
| ·LG结构域抑菌活性检测 | 第71页 |
| ·LG诱导条件优化 | 第71页 |
| ·结果 | 第71-75页 |
| ·抗菌肽LG基因PCR扩增 | 第71-72页 |
| ·分泌表达型重组质粒pYES2-α-LG构建及鉴定 | 第72页 |
| ·杂合肽LG Tricine-SDS-PAGE | 第72-73页 |
| ·杂合肽LG抑菌活性研究 | 第73-74页 |
| ·杂合肽LG诱导条件优化 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| 第五章 含重组质粒的酵母工程菌诱变 | 第76-83页 |
| 引论 | 第76-77页 |
| ·材料 | 第77-78页 |
| ·主要仪器设备 | 第77页 |
| ·菌株 | 第77页 |
| ·常用溶液及试剂配置 | 第77-78页 |
| ·方法 | 第78-79页 |
| ·工程菌诱变处理 | 第78-79页 |
| ·诱变工程菌筛选与性质研究 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-82页 |
| ·工程菌诱变筛选及性质研究 | 第79-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| 第六章 总结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第93页 |
