| 摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-17页 |
| 缩略语说明 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-49页 |
| 第一节 对凋亡细胞的识别及吞噬机制研究进展 | 第18-31页 |
| 一、对凋亡细胞的识别、吞噬与清除一般特征 | 第19-21页 |
| 二、对凋亡细胞吞噬的主要调控因素 | 第21-25页 |
| 三、调节凋亡细胞吞噬的信号转导途径 | 第25-31页 |
| 第二节 细胞自噬研究进展 | 第31-35页 |
| 1. 自噬的概念 | 第31页 |
| 2. 自噬的分类 | 第31页 |
| 3. 自噬的启动及发生过程 | 第31-32页 |
| 4. 自噬的功能 | 第32-33页 |
| 5. 自噬的信号调控 | 第33-35页 |
| 第三节 活性氧的生成与作用 | 第35-37页 |
| 1. 活性氧的概述 | 第35页 |
| 2. 活性氧的产生 | 第35-36页 |
| 3. 活性氧的功能 | 第36-37页 |
| 第四节 一氧化氮 | 第37-39页 |
| 1. NO的生成与特性 | 第37页 |
| 2. NO的生理病理功能 | 第37页 |
| 3. NO与肿瘤的关系 | 第37-39页 |
| 第五节 冬凌草甲素研究进展 | 第39-42页 |
| 1. 冬凌草简介 | 第39-40页 |
| 2. 药理作用 | 第40-42页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第40页 |
| ·抗菌消炎作用 | 第40页 |
| ·抗突变作用 | 第40-41页 |
| ·抗氧化作用 | 第41页 |
| ·镇痛作用 | 第41页 |
| ·其他作用 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 第二章 冬凌草甲素增强U937细胞对凋亡小体的吞噬及其调节通路 | 第49-69页 |
| 一、实验材料 | 第50-51页 |
| 1. 细胞 | 第50页 |
| 2. 药品及试剂 | 第50页 |
| 3. 仪器 | 第50-51页 |
| 二、实验方法 | 第51-52页 |
| 1. 乳酸脱氢酶活力测定法(LDH方法)测定分化细胞贴壁率 | 第51页 |
| 2. 紫外线(UV)照射诱导细胞凋亡 | 第51页 |
| 3. 细胞形态学变化观察 | 第51页 |
| 4. 吞噬形态学观察 | 第51-52页 |
| 5. 吞噬作用检测 | 第52页 |
| 6. 流式细胞分析法 | 第52页 |
| 7. Western印迹法 | 第52页 |
| 8. 统计学分析 | 第52页 |
| 三、实验结果 | 第52-63页 |
| 1. PMA诱导U937细胞分化为巨噬细胞 | 第52-54页 |
| 2. UV照射(52.1 J/m2)诱导凋亡小体的形成 | 第54-55页 |
| 3. 冬凌草甲素增强U937分化的巨噬细胞吞噬凋亡小体 | 第55-56页 |
| 4. 吞噬的形态学观察 | 第56页 |
| 5. PI3K-Akt及PLCγ参与冬凌草甲素诱导的吞噬刺激 | 第56-58页 |
| 6. Ras-Raf途径参与调节冬凌草甲素诱导的吞噬作用 | 第58-59页 |
| 7. MAPK在冬凌草甲素诱导的吞噬刺激中的作用 | 第59-60页 |
| 8. Ras/Raf1依赖性的ERK活化 | 第60页 |
| 9. NF-κB/COX-2/Caspase-1介导IL-1β释放参与调节冬凌草甲素诱导的吞噬 | 第60-62页 |
| 10. NF-κB的活化依赖Ras-ERK途径 | 第62-63页 |
| 四、讨论 | 第63-64页 |
| 五、小结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 第三章 冬凌草甲素诱导的自噬增强U937细胞对凋亡小体的吞噬作用 | 第69-86页 |
| 一、实验材料 | 第70页 |
| 二、实验方法 | 第70-71页 |
| 1. 自噬形态学观察 | 第70-71页 |
| 2. 流式细胞术测定自噬阳性率 | 第71页 |
| 3. 吞噬作用检测 | 第71页 |
| 4. siRNA转染方法 | 第71页 |
| 5. Western印迹法 | 第71页 |
| 三、实验结果 | 第71-82页 |
| 1. 2.5μM冬凌草甲素诱导U937细胞自噬形态学观察 | 第71-72页 |
| 2. 2.5 μM冬凌草甲素诱导U937细胞自噬阳性率测定 | 第72-73页 |
| 3. 2.5μM冬凌草甲素诱导自噬相关蛋白的表达 | 第73页 |
| 4. ERK、NF-κB、Caspase-1参与冬凌草甲素诱导的U937细胞自噬 | 第73-74页 |
| 5. 3MA抑制、Rapamycin促进冬凌草甲素诱导的U937细胞自噬 | 第74-75页 |
| 6. 3MA抑制、Rapamycin促进冬凌草甲素诱导的U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第75-77页 |
| 7. 3MA、Rapamycin影响自噬相关蛋白的表达 | 第77-78页 |
| 8. 3MA、Rapamycin影响ERK、NF-κB、Caspase-1及ProIL-1p的表达 | 第78-79页 |
| 9. Beclin-1 siRNA抑制冬凌草甲素诱导的自噬及对凋亡小体的吞噬 | 第79-81页 |
| 10. Beclin-1 siRNA影响自噬相关蛋白及ERK、NF-κB、Caspase-1、Pro IL-1β的表达 | 第81-82页 |
| 四、讨论 | 第82-83页 |
| 五、小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
| 第四章 冬凌草甲素诱导活性氧及一氧化氮产生促进对凋亡小体的吞噬机制研究 | 第86-119页 |
| 第一节 冬凌草甲素诱导活性氧的产生促进U937细胞对凋亡小体的吞噬机制研究 | 第86-100页 |
| 一、实验材料 | 第87页 |
| 二、实验方法 | 第87-88页 |
| 1. ROS阳性细胞比率测定 | 第87页 |
| 2. 自噬形态学及流式细胞术测定自噬阳性率 | 第87页 |
| 3. 吞噬作用检测 | 第87页 |
| 4. 线粒体膜电位的检测 | 第87-88页 |
| 5. 细胞内ATP含量测定方法 | 第88页 |
| 6. Western印迹法 | 第88页 |
| 7. 统计学方法 | 第88页 |
| 三、实验结果 | 第88-97页 |
| 1. 2.5μM冬凌草甲素时间依赖性诱导U937细胞产生ROS | 第88-89页 |
| 2. 冬凌草甲素诱导的ROS以H2O2及·OH为主要形式 | 第89-90页 |
| 3. ROS的清除剂抑制冬凌草甲素诱导的U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第90页 |
| 4. H2O2及·OH参与调节冬凌草甲素增强的U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第90-91页 |
| 5. 冬凌草甲素诱导U937细胞线粒体膜电位降低 | 第91-92页 |
| 6. ROS通过调节线粒体膜电位影响U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第92-93页 |
| 7. ROS对吞噬的调节不依赖于ATP的产生 | 第93-94页 |
| 8. ROS通过调节自噬影响U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第94-96页 |
| 9. ROS调节PI3K-Akt/PLCγ-PKC通路影响U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第96-97页 |
| 四、讨论 | 第97-98页 |
| 五、小结 | 第98-100页 |
| 第二节 冬凌草甲素诱导一氧化氮的产生促进U937细胞对凋亡小体的吞噬机制研究 | 第100-115页 |
| 一、实验材料 | 第101页 |
| 二、实验方法 | 第101-102页 |
| 1. NO阳性细胞比率测定 | 第101页 |
| 2. Griess法测定NO含量 | 第101页 |
| 3. 流式细胞术测定自噬阳性率 | 第101-102页 |
| 4. 吞噬作用检测 | 第102页 |
| 5. ELISA试剂盒测定IL-1β含量方法 | 第102页 |
| 6. siRNA转染 | 第102页 |
| 7. Western印迹法 | 第102页 |
| 8. 统计学方法 | 第102页 |
| 三、实验结果 | 第102-112页 |
| 1. 2.5μM冬凌草甲素时间依赖性诱导U937细胞产生NO | 第102-103页 |
| 2. 一氧化氮合酶抑制剂1400W及L-NAME抑制NO的产生及iNOS表达 | 第103-105页 |
| 3. 冬凌草甲素诱导的NO参与U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第105-106页 |
| 4. NO通过调节自噬影响U937细胞对凋亡小体的吞噬 | 第106-108页 |
| 5. NO对吞噬的调节需要自噬的参与,而自噬负反馈调节NO的产生 | 第108-110页 |
| 6. NO的产生促进IL-1β的成熟和分泌 | 第110-111页 |
| 7. NO的产生激活NF-κB/COX-2途径 | 第111页 |
| 8. NF-κB/COX-2正反馈调节NO的产生 | 第111-112页 |
| 四、讨论 | 第112-113页 |
| 五、小结 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 附录 | 第120-122页 |
| 附件 | 第122-132页 |
