胸膜肺炎放线杆菌五基因缺失疫苗菌株构建及生物学特性分析
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词（Abbreviation) | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-20页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的危害与防治 | 第12-13页 |
| ·病原生理生化特性 | 第12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·疫苗研究进展 | 第13-17页 |
| ·灭活苗 | 第14页 |
| ·亚单位疫苗 | 第14-15页 |
| ·口服疫苗 | 第15页 |
| ·核酸疫苗 | 第15页 |
| ·Ghosts疫苗 | 第15-16页 |
| ·弱毒疫苗 | 第16-17页 |
| ·细菌双组份调控系统研究进展 | 第17-20页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第3章 材料与方法 | 第21-35页 |
| ·试验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第21-22页 |
| ·工具酶和试剂 | 第22-23页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·培养基及抗生素配制 | 第23页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第23页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-35页 |
| ·细菌的增殖及胸膜肺炎放线杆菌基因组的提取 | 第24页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第24-25页 |
| ·质粒的小量制备 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·PCR鉴定 | 第26页 |
| ·酶切鉴定 | 第26页 |
| ·突变株的构建 | 第26-27页 |
| ·细菌RNA提取 | 第27-28页 |
| ·DnaseⅠ消化RNA中残余的DNA | 第28页 |
| ·反转录PCR | 第28-29页 |
| ·突变株遗传稳定性分析 | 第29页 |
| ·突变株生长特性的研究 | 第29页 |
| ·细胞感染实验 | 第29-30页 |
| ·细胞的培养 | 第29页 |
| ·细胞侵入实验 | 第29页 |
| ·细胞粘附实验 | 第29-30页 |
| ·中性粒细胞(PMN)介导的杀菌实验 | 第30页 |
| ·猪中性粒细胞的分离 | 第30页 |
| ·细菌的处理 | 第30页 |
| ·PMN杀菌实验 | 第30页 |
| ·细胞吞噬试验 | 第30-31页 |
| ·细胞准备 | 第30-31页 |
| ·细胞吞噬试验 | 第31页 |
| ·突变株毒力分析 | 第31页 |
| ·淋巴细胞增殖试验(MTT) | 第31-32页 |
| ·全血杀菌试验 | 第32页 |
| ·抗体检测分析 | 第32页 |
| ·抗体分型检测 | 第32-33页 |
| ·ELISA试剂盒检测细胞因子水平 | 第33页 |
| ·突变株对小鼠的免疫保护试验 | 第33-34页 |
| ·病理切片制备 | 第34页 |
| ·统计分析 | 第34-35页 |
| 第4章 结果与分析 | 第35-44页 |
| ·重组质粒构建及单交换菌株筛选 | 第35页 |
| ·突变株的筛选和鉴定 | 第35-36页 |
| ·突变株遗传稳定 | 第36-37页 |
| ·突变株生长特性 | 第37页 |
| ·细胞粘附和侵入试验 | 第37-38页 |
| ·猪中性粒细胞介导杀伤试验 | 第38页 |
| ·RAW与PAM | 第38-39页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第39-40页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第40页 |
| ·小鼠全血杀菌试验 | 第40-41页 |
| ·抗体检测试验 | 第41页 |
| ·抗体分型检测试验 | 第41页 |
| ·细胞因子检测 | 第41-42页 |
| ·小鼠免疫保护力试验 | 第42-43页 |
| ·病理切片分析 | 第43-44页 |
| 第5章 讨论 | 第44-48页 |
| ·亲本菌株的选择 | 第44页 |
| ·目的基因的选择 | 第44-45页 |
| ·生物学特性分析 | 第45页 |
| ·突变株致病力分析 | 第45页 |
| ·突变株免疫保护效能 | 第45-47页 |
| ·后续工作展望 | 第47-48页 |
| 第6章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
