| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| ·木质纤维素及纤维素酶 | 第11-14页 |
| ·木质纤维素 | 第11-12页 |
| ·木质纤维素预处理 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶 | 第13-14页 |
| ·纤维素丁醇发酵 | 第14-17页 |
| ·丁醇发酵微生物 | 第14-17页 |
| ·选题的研究意义与目的 | 第17页 |
| ·本课题创新点 | 第17-18页 |
| ·技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 方法与步骤 | 第19-31页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂和酶 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·方法与步骤 | 第20-31页 |
| ·C.phytofermentans总DNA的提取 | 第20-21页 |
| ·基因cphy3367的引物设计和PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR产物酶切处理 | 第22页 |
| ·pSOS95质粒DNA的小量制备 | 第22页 |
| ·pSOS95质粒DNA酶切处理 | 第22页 |
| ·目的基因与载体的连接反应 | 第22-23页 |
| ·目的基因缺失载体的构造 | 第23页 |
| ·E. coli XL1-blue感受态的制备 | 第23-24页 |
| ·连接产物对E. coli XL1-blue感受态细胞的转化 | 第24页 |
| ·重组菌株的质粒酶切验证 | 第24-25页 |
| ·重组菌株的质粒PCR验证 | 第25页 |
| ·重组大肠杆菌目的基因转录情况定量PCR分析 | 第25-27页 |
| ·重组大肠杆菌目的蛋白酶活测定 | 第27页 |
| ·重组质粒甲基化处理 | 第27-28页 |
| ·甲基化处理后的重组质粒电转化入丙酮丁醇梭菌ATCC824 | 第28页 |
| ·电转化后重组丙酮丁醇梭菌筛选 | 第28-29页 |
| ·重组丙酮丁醇梭目的基因cphy3367转录情况定量PCR分析 | 第29页 |
| ·重组丙酮丁醇梭菌纤维素发酵情况分析 | 第29-30页 |
| ·葡萄糖标准曲线绘制 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-45页 |
| ·重组质粒pSOS95-cphy3367和pSOS95de1构造 | 第31-33页 |
| ·C.phytofermentans总DNA的提取 | 第31页 |
| ·目的基因cphy3367的扩增 | 第31-32页 |
| ·NarI、BamHI双酶切处理pSOS95质粒 | 第32页 |
| ·目的基因cphy3367与载体pSOS95的连接重组 | 第32-33页 |
| ·重组质粒酶切、PCR和测序验证 | 第33页 |
| ·来自厌氧梭菌的thiolase promoter在大肠杆菌中组成型表达纤维素内切酶基因以及表达情况分析 | 第33-38页 |
| ·重组质粒对于大肠杆菌转化 | 第34-35页 |
| ·重组菌株生长曲线的绘制 | 第35页 |
| ·目的基因转录情况分析 | 第35-37页 |
| ·重组菌株固体培养基生长情况 | 第37-38页 |
| ·重组丙酮丁醇梭菌纤维素发酵情况分析 | 第38-45页 |
| ·重组质粒甲基化处理 | 第38页 |
| ·甲基化重组质粒对于丙酮丁醇梭菌ATCC824电转化过程及筛选结果 | 第38-39页 |
| ·重组丙丁梭菌ATCC824/pSOS95-cphy3367中cphy3367基因转录情况分析 | 第39-40页 |
| ·重组丙酮丁醇梭菌纤维素发酵情况分析 | 第40-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-51页 |
| ·厌氧梭菌组成型启动子在大肠杆菌中组成型表达纤维素内切酶基因情况分析 | 第45-48页 |
| ·讨论硫解酶启动子在大肠杆菌中启动子功能的意义 | 第45-46页 |
| ·重组载体对于大肠杆菌转化过程 | 第46页 |
| ·目的基因转录情况分析 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白表达情况分析 | 第47页 |
| ·硫解酶启动子序列分析 | 第47-48页 |
| ·重组丙酮丁醇梭菌利用纤维素发酵情况分析 | 第48-51页 |
| ·对于丙酮丁醇梭菌ATCC824纤维素基因进行改造的意义 | 第48-49页 |
| ·重组丙丁梭菌ATCC824/pSOS95-cphy3367中cphy3367基因转录情况分析 | 第49页 |
| ·重组丙酮丁醇梭菌滤纸纤维素发酵情况分析 | 第49-50页 |
| ·重组丙酮丁醇梭菌蔗渣水解液发酵情况分析 | 第50-51页 |
| 第五章 结论与展望 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| ·问题与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 附录 | 第61-74页 |
| 附录1 相关培养基和试剂的配制 | 第61-62页 |
| 附录2 相关基因序列 | 第62-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
