| 致谢 | 第1-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 间充质干细胞 | 第12-14页 |
| ·间充质干细胞的生物学特性 | 第12页 |
| ·间充质干细胞的分离培养 | 第12-13页 |
| ·间充质干细胞向胰岛细胞分化 | 第13-14页 |
| ·环境诱导 | 第13页 |
| ·基因诱导 | 第13-14页 |
| ·骨髓间充质干细胞向胰岛细胞分化的优势 | 第14页 |
| 2 DNA 甲基化与干细胞分化 | 第14-17页 |
| ·表观遗传学及 DNA 甲基化概述 | 第14-15页 |
| ·DNA 甲基化与基因表达调控 | 第15页 |
| ·DNA 甲基化水平在调控胰岛细胞分化中的作用 | 第15-17页 |
| ·胰岛细胞分化的关键调控基因 | 第15-16页 |
| ·PDX-1 | 第16页 |
| ·Ngn3 | 第16页 |
| ·Nkx6.1 | 第16页 |
| ·MafA | 第16页 |
| ·DNA 甲基化水平在调控胰岛细胞分化中的作用 | 第16-17页 |
| 3 影响胰岛细胞分化的其它因素 | 第17-19页 |
| ·葡萄糖 | 第17页 |
| ·二甲基亚砜 | 第17-18页 |
| ·尼克酰胺 | 第18页 |
| ·谷氨酰胺 | 第18-19页 |
| 试验一 红细胞裂解法对兔骨髓间充质干细胞体外分离、培养、纯化及鉴定的研究 | 第19-28页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-22页 |
| ·试验材料 | 第19-20页 |
| ·试验动物 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器与器械 | 第19-20页 |
| ·溶液的配制 | 第20-21页 |
| ·PBS 缓冲液 | 第20页 |
| ·0.25%胰蛋白酶消化液 | 第20页 |
| ·DMEM/F-12 培养液 | 第20页 |
| ·双抗的配制 | 第20页 |
| ·FBS 的冻融 | 第20-21页 |
| ·L-谷氨酰胺浓缩液 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-22页 |
| ·红细胞裂解法分离兔骨髓间充质干细胞 | 第21页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞的传代 | 第21页 |
| ·原代细胞的传代 | 第21页 |
| ·非原代细胞的传代 | 第21页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞生长曲线及群体倍增时间的测定 | 第21页 |
| ·细胞生长曲线测定 | 第21页 |
| ·群体倍增时间计算 | 第21页 |
| ·免疫细胞化学法鉴定兔骨髓间充质干细胞 | 第21-22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-24页 |
| ·红细胞裂解法分离的兔 BMSCs 形态学观察 | 第22-24页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞生长特性 | 第24页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞的表面抗原检测 | 第24页 |
| 3 讨论 | 第24-27页 |
| ·兔 BMSCs 的分离培养 | 第25-26页 |
| ·兔 BMSCS 的传代 | 第26页 |
| ·兔 BMSCS 的鉴定 | 第26-27页 |
| 4 小结 | 第27-28页 |
| 试验二 甲基化抑制剂—5-aza-dC 在兔 BMSCs 向胰岛细胞分化中的作用研究 | 第28-36页 |
| 引言 | 第28页 |
| 1 材料与方法 | 第28-31页 |
| ·试验材料 | 第28-29页 |
| ·试验对象 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器与器械 | 第29页 |
| ·主要试剂配制 | 第29-30页 |
| ·含 0.5％DMSO 的无血清 DMEM/F-1220 | 第29页 |
| ·含 5％FBS 的 H-DMEM 培养液 | 第29-30页 |
| ·双硫腙染色剂 | 第30页 |
| ·0.2％TritonX-10021 | 第30页 |
| ·5-aza-dC 的配制 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-31页 |
| ·MTT 法检测 DNA 甲基化抑制剂 5-aza-dC 对细胞活力的影响 | 第30页 |
| ·5-aza-dC 联合 DMSO、尼克酰胺向胰岛细胞的诱导 | 第30-31页 |
| ·双硫腙法鉴定诱导后 BMSCs 的胰岛素表达 | 第31页 |
| ·免疫荧光法鉴定胰岛 PDX-1 蛋白表达 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-34页 |
| ·MTT 法检测 5-aza-dC 对细胞活力的影响 | 第31-32页 |
| ·诱导后兔 BMSCs 的形态学观察 | 第32-33页 |
| ·双硫腙染色鉴定胰岛素分泌 | 第33-34页 |
| ·间接免疫荧光法检测胰岛 PDX-1 蛋白表达 | 第34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 4 小结 | 第35-36页 |
| 试验三 胰岛细胞特异调控基因 PDX-1 分子水平的检测 | 第36-42页 |
| 引言 | 第36页 |
| 1 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·试验对象 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·主要仪器与器械 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-39页 |
| ·RNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·RNA 纯度测定 | 第38页 |
| ·cDNA 的合成 | 第38页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·PCR 扩增 | 第39页 |
| ·PCR 产物电泳检测 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-40页 |
| ·RNA 纯度测定 | 第39页 |
| ·PDX-1 基因电泳结果 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-51页 |
| 英文缩写词表 | 第51-52页 |
| ABSTRACT | 第52-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
