| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1. 植物非生物胁迫的应答机制 | 第13-18页 |
| ·非生物胁迫对植物的影响 | 第13-15页 |
| ·盐胁迫对植物的影响 | 第13-14页 |
| ·旱胁迫对植物的影响 | 第14-15页 |
| ·植物的应激响应 | 第15-16页 |
| ·调整渗透调节 | 第16页 |
| ·调节细胞膜 | 第16页 |
| ·增强抗氧化能力 | 第16页 |
| ·非生物胁迫下的信号转导及相关基因的调控 | 第16-18页 |
| 2. 植物抗逆相关转录因子 | 第18-21页 |
| ·植物转录因子的结构 | 第18页 |
| ·植物转录因子相关功能 | 第18-20页 |
| ·高等植物转录因子的分类 | 第20-21页 |
| 3. NAC转录因子 | 第21-30页 |
| ·NAC转录因子的起源与分类 | 第21-23页 |
| ·NAC转录因子的起源 | 第21-22页 |
| ·NAC蛋白的分类 | 第22-23页 |
| ·NAC转录因子的发现及其分布、结构特点 | 第23-24页 |
| ·NAC转录因子的发现 | 第23页 |
| ·NAC转录因子在生物体中的分布 | 第23页 |
| ·NAC转录因子的结构特征 | 第23-24页 |
| ·NAC转录因子参与植物的生长发育过程 | 第24-26页 |
| ·NAC转录因子参与植物种子萌发 | 第24页 |
| ·NAC转录因子参与植物细胞分裂 | 第24-25页 |
| ·NAC转录因子参与植物细胞的次生壁合成 | 第25页 |
| ·NAC转录因子参与植物开花 | 第25-26页 |
| ·NAC转录因子参与植物衰老过程 | 第26页 |
| ·NAC转录因子对Fe元素平衡的调节作用 | 第26页 |
| ·NAC转录因子参与多种逆境胁迫的响应 | 第26-28页 |
| ·NAC转录因子的表达调控 | 第28-30页 |
| ·转录调控 | 第28页 |
| ·转录后的调控 | 第28页 |
| ·翻译后调控 | 第28-30页 |
| 第二章 研究工作 | 第30-58页 |
| 引言 | 第30页 |
| 一、实验材料 | 第30-37页 |
| 1.材料及生长条件 | 第30-32页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第30-31页 |
| ·胁迫处理条件及发育期的选择 | 第31-32页 |
| ·小麦发育期选择及各种处理条件 | 第31页 |
| ·拟南芥发育期选择及胁迫处理条件 | 第31-32页 |
| 2 菌株和载体质粒 | 第32-33页 |
| 3 药品试剂、主要溶液、培养基及其配制 | 第33-37页 |
| ·药品试剂 | 第33-34页 |
| ·主要溶液及配制 | 第34-35页 |
| ·培养基及其配制 | 第35-37页 |
| 二、实验方法 | 第37-58页 |
| 1. 小麦TaNAC6A基因cDNA全长的克隆与序列分析 | 第37-40页 |
| ·TRIZOL法提取小麦总RNA | 第37-38页 |
| ·总RNA的纯化 | 第38页 |
| ·RNA反转录及第一链cDNA合成 | 第38-39页 |
| ·片段的酶切与连接 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第39页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第39-40页 |
| ·转化子鉴定 | 第40页 |
| ·序列分析 | 第40页 |
| 2. 基因表达模式分析 | 第40-42页 |
| ·小麦目的基因表达模式分析 | 第40-41页 |
| ·拟南芥相关Marker基因表达模式分析 | 第41-42页 |
| 3. 基因亚细胞定位实验 | 第42-47页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第42页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第42-43页 |
| ·琼脂糖凝胶DNA条带的回收 | 第43页 |
| ·无内毒素的质粒提取 | 第43-45页 |
| ·PEG介导的小麦原生质体转化 | 第45-46页 |
| ·洋葱表皮细胞基因枪转化法 | 第46-47页 |
| 4. 原核表达 | 第47-48页 |
| ·cDNA序列扩增 | 第47页 |
| ·目的基因的pET-32a载体构建 | 第47-48页 |
| ·重组酶在E.coli BL21中的重组表达 | 第48页 |
| 5. 转录因子体外活性分析 | 第48-50页 |
| ·目的基因的获得及载体构建 | 第48-49页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第49页 |
| ·小量法转化酵母感受态及体外转录活性鉴定 | 第49-50页 |
| 6. 过表达转基因拟南芥株系的获得 | 第50-53页 |
| ·过表达载体的构建 | 第50页 |
| ·农杆菌EHA105感受态制备 | 第50页 |
| ·冻融法转化根癌农杆菌EHA105 | 第50-51页 |
| ·拟南芥转化 | 第51页 |
| ·转基因拟南芥阳性株系的筛选与鉴定 | 第51-52页 |
| ·过表达拟南芥表型分析 | 第52-53页 |
| ·种子萌发实验 | 第52页 |
| ·根的伸长实验 | 第52-53页 |
| ·旱胁迫处理实验 | 第53页 |
| 7. 启动子克隆及分析 | 第53-58页 |
| ·小麦基因组DNA的提取 | 第53-54页 |
| ·构建小麦BD Genome Walker库 | 第54-55页 |
| ·巢式PCR | 第55-56页 |
| ·启动子序列分析 | 第56-58页 |
| 第三章 结果分析 | 第58-82页 |
| 1. 小麦TaNAC6A基因对应探针在芯片数据库中的表达变化情况 | 第58-59页 |
| 2. TaNAC6A cDNA的克隆与序列分析 | 第59-61页 |
| 3. 非生物胁迫与激素处理条件下TaNAC6A的表达模式 | 第61-62页 |
| 4. TaNAC6A的体外转录激活实验 | 第62-64页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·TaNAC6A的体外转录激活实验 | 第63-64页 |
| 5. TaNAC6A亚细胞定位 | 第64-65页 |
| 6 原核表达 | 第65-66页 |
| 7. 拟南芥TaNAC6A过表达株系的获得 | 第66-69页 |
| ·拟南芥过表达载体的构建 | 第66-68页 |
| ·拟南芥过表达株系的获取 | 第68-69页 |
| 8. 拟南芥TaNAC6A过表达株系的表型实验 | 第69-77页 |
| ·过表达TaNAC6A基因提高抗盐性 | 第69-71页 |
| ·过表达TaNAC6A基因对ABA的响应 | 第71-73页 |
| ·过表达TaNAC6A基因对GA的响应 | 第73-74页 |
| ·过表达TaNAC6A基因植株抗旱能力的提高 | 第74-75页 |
| ·过表达TaNAC6A基因植株的生长发育特征 | 第75-77页 |
| 9. TaNAC6A启动子克隆及结果分析 | 第77-79页 |
| 10. TaNAC6A过表达植株相关Marker基因的表达分析 | 第79-82页 |
| 讨论 | 第82-84页 |
| 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
| 发表论文 | 第95页 |
| 申请专利 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第97页 |
