| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1.植物耐盐研究现状 | 第14-18页 |
| ·盐胁迫对植物的影响 | 第14-15页 |
| ·植物耐盐相关基因研究 | 第15-17页 |
| ·渗透调节相关基因 | 第15-16页 |
| ·植物耐盐保护性蛋白相关基因 | 第16-17页 |
| ·植物耐盐基因工程研究进展 | 第17-18页 |
| 2.草坪草性状改良研究进展 | 第18-20页 |
| ·草坪草简介 | 第18-19页 |
| ·草坪草遗传转化方法及改良 | 第19-20页 |
| 3.大豆耐盐基因工程研究 | 第20-22页 |
| ·盐对大豆的影响 | 第20-21页 |
| ·大豆耐盐基因工程研究进展 | 第21-22页 |
| 4.AP2/EREBP转录因子 | 第22-26页 |
| ·AP2/EREBP转录因子基因家族 | 第22-23页 |
| ·CBF/DREB转录因子的结构特点 | 第23页 |
| ·DREB转录因子在非生物胁迫中的作用 | 第23-26页 |
| ·DREB基因增强植物抗逆性相关研究 | 第26页 |
| 5.植物锌指蛋白研究进展 | 第26-29页 |
| ·RING finger蛋白的发现、结构特点及分类 | 第27-28页 |
| ·植物RING finger的功能研究进展 | 第28-29页 |
| 6.立题意义 | 第29页 |
| 第二章 耐盐基因ATNTL5的高羊茅遗传转化 | 第29-44页 |
| 1.实验材料 | 第29-31页 |
| ·植物材料 | 第29-30页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·质粒 | 第30页 |
| ·常用试剂及培养基 | 第30-31页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·常用培养基 | 第30-31页 |
| 2.实验方法 | 第31-38页 |
| ·农杆菌介导的高羊茅转化 | 第31-32页 |
| ·高羊茅愈伤组织诱导 | 第31页 |
| ·农杆菌的准备 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·植物基因组DNA提取(CTAB法) | 第32页 |
| ·PCR检测转基因植株 | 第32-33页 |
| ·Southern-blot分析 | 第33-37页 |
| ·总蛋白SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| ·转基因高羊茅植株耐盐性分析 | 第38页 |
| 3.实验结果 | 第38-43页 |
| ·高羊茅愈伤组织诱导及再生体系的建立 | 第38页 |
| ·AtNTL5基因对高羊茅愈伤组织的转化 | 第38页 |
| ·高养茅愈伤组织诱导及转基因植株的生长情况 | 第38-39页 |
| ·转基因植株的检测 | 第39-41页 |
| ·SDS-PAGE分析转基因高羊茅植株总蛋白 | 第41-42页 |
| ·转AtNTL5高羊茅抗盐性初步分析 | 第42-43页 |
| 4.讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 大豆AP2/EREBP家族基因GMDREB1D基因克隆及功能初步分析 | 第44-72页 |
| 1.实验材料 | 第44-47页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·植物培养材料 | 第44页 |
| ·菌株和载体 | 第44页 |
| ·生化试剂和酶 | 第44-45页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| ·溶液和培养基的配制 | 第45-47页 |
| ·常用溶液 | 第45-46页 |
| ·常用培养基 | 第46-47页 |
| 2.实验方法 | 第47-58页 |
| ·植物总RNA提取 | 第47-48页 |
| ·cDNA合成 | 第48页 |
| ·植物DNA提取(CTAB法) | 第48页 |
| ·PCR扩增 | 第48-50页 |
| ·普通TAQ酶催化的RT-PCR扩增(20 ML克隆体系) | 第48-49页 |
| ·高保真酶PRIMER STAR基因克隆反应体系(50μL克隆体系) | 第49-50页 |
| ·克隆得到基因片段的纯化回收(天根试剂盒) | 第50页 |
| ·克隆基因片段的连接或BP、LR反应 | 第50-51页 |
| ·连接(Takara T4 DNA连接酶) | 第50-51页 |
| ·BP和LR反应(Gateway系统) | 第51页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和质粒转化 | 第51页 |
| ·感受态的制备(无菌操作) | 第51页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第51页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第51-53页 |
| ·碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第51-52页 |
| ·试剂盒提取大肠杆菌质粒(天根试剂盒) | 第52-53页 |
| ·基因转录激活活性分析 | 第53-55页 |
| ·载体构建 | 第53-54页 |
| ·目的基因的获得 | 第53页 |
| ·载体构建步骤 | 第53-54页 |
| ·酵母感受态制备 | 第54页 |
| ·酵母质粒转化 | 第54页 |
| ·阳性酵母菌株的鉴定及保存 | 第54-55页 |
| ·-His缺陷培养基筛选及β-半乳糖苷酶显色反应 | 第55页 |
| ·农杆菌感受态的制备和质粒转化 | 第55-56页 |
| ·感受态制备 | 第55-56页 |
| ·农杆菌质粒转化 | 第56页 |
| ·花侵染法转化拟南芥 | 第56页 |
| ·拟南芥种了表面灭菌 | 第56页 |
| ·拟南芥转基因植株筛选 | 第56-57页 |
| ·非生物胁迫和激素处理大豆 | 第57页 |
| ·转基因拟南芥逆境处理下的表型 | 第57-58页 |
| ·转基因拟南芥植株对高盐的耐受性 | 第57页 |
| ·转基因拟南芥植株对干旱的耐受性 | 第57-58页 |
| ·转基因拟南芥植株对冷的耐受性 | 第58页 |
| ·转基因拟南芥萌发率测定 | 第58页 |
| ·转基因拟南芥逆境处理下的根的生长 | 第58页 |
| 3.结果与讨论 | 第58-70页 |
| ·候选基因GmDREB1D的筛选及克隆 | 第58-59页 |
| ·序列及系统进化分析 | 第59-61页 |
| ·GmDREB1D转录激活活性分析 | 第61-63页 |
| ·GmDREB1D基因组织表达模式及其对激素和非生物胁迫的应答模式分析 | 第63-64页 |
| ·p35S::GmDREB1D载体构建 | 第64-65页 |
| ·拟南芥转化及过表达转基因纯系的获得 | 第65-66页 |
| ·35S::GmDREB1植株表型 | 第66-67页 |
| ·355::GmDREB1植株根在非生物胁迫下的生长情况 | 第67-68页 |
| ·高盐和低温胁迫下的35S::GmDREB1植株表型分析 | 第68-70页 |
| 4.讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 大豆锌指蛋白家族转录因子GMRF基因克隆及功能初步分析 | 第72-84页 |
| 1.实验材料 | 第72页 |
| 2.实验方法 | 第72页 |
| 3.结果与讨论 | 第72-82页 |
| ·候选基因GmRF的筛选及克隆 | 第72-73页 |
| ·GmRF氨基酸序列及系统分析 | 第73-74页 |
| ·GmRF转录激活活性分析 | 第74-75页 |
| ·基因组织表达模式及对激素和非生物胁迫的应答模式分析 | 第75-76页 |
| ·拟南芥过表达转基因植株的获得 | 第76-78页 |
| ·p35S::GmRF过表达拟南芥表型分析 | 第78-80页 |
| ·非生物胁迫下的GmRF转基因拟南芥根生长 | 第80-82页 |
| 讨论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 附录 引物列表 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第96页 |
