中文摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
符号说明 | 第10-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-31页 |
第一节 小麦遗传转化的研究进展 | 第12-29页 |
·小麦遗传转化的主要方法 | 第13-18页 |
·基因枪介导的小麦转化 | 第13-14页 |
·农杆菌介导的小麦转化 | 第14-17页 |
·其他方法介导的小麦遗传转化 | 第17-18页 |
·小麦转基因技术研究进展 | 第18-23页 |
·小麦愈伤组织诱导外植体类型选择 | 第18-21页 |
·小麦遗传转化操作中外植体与基因型的选择 | 第21-22页 |
·表面活性剂及乙酰丁香酮(AS)的使用 | 第22-23页 |
·农杆菌和载体类型 | 第23页 |
·转基因植株的检测方法 | 第23-28页 |
·标记基因的筛选与鉴定 | 第24-26页 |
·转基因植株的PCR检测 | 第26页 |
·Southern blot | 第26-27页 |
·ELISA检测 | 第27-28页 |
·植物耐逆转录因子 | 第28-29页 |
第二节 本研究的创新性、的目的与意义 | 第29-31页 |
第二章 材料与方法 | 第31-47页 |
第一节 实验材料 | 第31-32页 |
·转化所用农杆菌菌株、目的基因和质粒载体 | 第31-32页 |
·小麦愈伤组织材料 | 第32页 |
第二节 实验试剂及耗材 | 第32-37页 |
·实验所用培养基 | 第32-34页 |
·实验试剂 | 第34-37页 |
第三节 实验方法 | 第37-47页 |
·愈伤组织转化与植株再生 | 第37-39页 |
·小麦幼胚愈伤组织诱导 | 第37页 |
·愈伤组织继代培养 | 第37页 |
·农杆菌的活化及悬浮液制备 | 第37页 |
·农杆菌浸染转化与共培养 | 第37-38页 |
·愈伤组织的抑菌恢复培养与筛选培养 | 第38页 |
·转基因抗性愈伤组织的植株再生与壮苗培养 | 第38页 |
·转基因再生植株的移栽 | 第38-39页 |
·转化愈伤组织与再生植株的阳性检出 | 第39-45页 |
·质粒DNA提取 | 第39-40页 |
·植物基因组DNA提取 | 第40-41页 |
·GUS活性检测 | 第41页 |
·再生植株PCR检测 | 第41-42页 |
·Southern blot验证 | 第42-45页 |
·转化流程与相关参数的优化 | 第45-47页 |
·抑制转化体中农杆菌生长的抗生素的选择 | 第45页 |
·Bialaphos最佳筛选浓度的确定 | 第45页 |
·农杆菌悬浮液浸染前愈伤组织预处理方式的选择 | 第45-46页 |
·农杆菌与愈伤组织最佳共培养温度的选择 | 第46页 |
·不同抑制、去除农杆菌方式的选择 | 第46-47页 |
第三章 实验结果 | 第47-61页 |
第一节 农杆菌介导的小麦愈伤组织遗传转化流程与相关参数优化 | 第47-54页 |
·农杆菌介导的小麦愈伤组织遗传转化基本流程 | 第47-48页 |
·抑制农杆菌抗生素的选择 | 第48-49页 |
·农杆菌浸染前愈伤组织预处理方式的选择 | 第49-50页 |
·最适共培养温度的选择 | 第50-51页 |
·共培养后不同抑菌方式的比较 | 第51-52页 |
·最佳Bialaphos筛选浓度的确定 | 第52-53页 |
·再生植株有效移栽的探索 | 第53-54页 |
第二节 转基因愈伤组织与再生植株的检测 | 第54-61页 |
·愈伤组织的GUS组织活性检测 | 第54页 |
·T0代植株的PCR检测 | 第54-56页 |
·T0代转基因小麦叶片的GUS组织活性检测 | 第56-57页 |
·T1代转基因植株PCR检测 | 第57-58页 |
·T1代转基因阳性植株的Southern Blot验证 | 第58页 |
·T1代转基因植株除草剂抗性与耐盐性检测 | 第58-61页 |
第四章 讨论 | 第61-65页 |
·农杆菌介导的小麦愈伤组织遗传转化方法优化 | 第61-63页 |
·转基因再生植株的移栽 | 第63-64页 |
·小麦TaCHP基因转基因植株的获得 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-71页 |
致谢 | 第71-72页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |