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农杆菌介导的小麦愈伤组织遗传转化及再生体系研究

中文摘要第1-8页
Abstract第8-10页
符号说明第10-11页
第一章 文献综述第11-31页
 第一节 小麦遗传转化的研究进展第12-29页
   ·小麦遗传转化的主要方法第13-18页
     ·基因枪介导的小麦转化第13-14页
     ·农杆菌介导的小麦转化第14-17页
     ·其他方法介导的小麦遗传转化第17-18页
   ·小麦转基因技术研究进展第18-23页
     ·小麦愈伤组织诱导外植体类型选择第18-21页
     ·小麦遗传转化操作中外植体与基因型的选择第21-22页
     ·表面活性剂及乙酰丁香酮(AS)的使用第22-23页
     ·农杆菌和载体类型第23页
   ·转基因植株的检测方法第23-28页
     ·标记基因的筛选与鉴定第24-26页
     ·转基因植株的PCR检测第26页
     ·Southern blot第26-27页
     ·ELISA检测第27-28页
   ·植物耐逆转录因子第28-29页
 第二节 本研究的创新性、的目的与意义第29-31页
第二章 材料与方法第31-47页
 第一节 实验材料第31-32页
   ·转化所用农杆菌菌株、目的基因和质粒载体第31-32页
   ·小麦愈伤组织材料第32页
 第二节 实验试剂及耗材第32-37页
   ·实验所用培养基第32-34页
   ·实验试剂第34-37页
 第三节 实验方法第37-47页
   ·愈伤组织转化与植株再生第37-39页
     ·小麦幼胚愈伤组织诱导第37页
     ·愈伤组织继代培养第37页
     ·农杆菌的活化及悬浮液制备第37页
     ·农杆菌浸染转化与共培养第37-38页
     ·愈伤组织的抑菌恢复培养与筛选培养第38页
     ·转基因抗性愈伤组织的植株再生与壮苗培养第38页
     ·转基因再生植株的移栽第38-39页
   ·转化愈伤组织与再生植株的阳性检出第39-45页
     ·质粒DNA提取第39-40页
     ·植物基因组DNA提取第40-41页
     ·GUS活性检测第41页
     ·再生植株PCR检测第41-42页
     ·Southern blot验证第42-45页
   ·转化流程与相关参数的优化第45-47页
     ·抑制转化体中农杆菌生长的抗生素的选择第45页
     ·Bialaphos最佳筛选浓度的确定第45页
     ·农杆菌悬浮液浸染前愈伤组织预处理方式的选择第45-46页
     ·农杆菌与愈伤组织最佳共培养温度的选择第46页
     ·不同抑制、去除农杆菌方式的选择第46-47页
第三章 实验结果第47-61页
 第一节 农杆菌介导的小麦愈伤组织遗传转化流程与相关参数优化第47-54页
   ·农杆菌介导的小麦愈伤组织遗传转化基本流程第47-48页
   ·抑制农杆菌抗生素的选择第48-49页
   ·农杆菌浸染前愈伤组织预处理方式的选择第49-50页
   ·最适共培养温度的选择第50-51页
   ·共培养后不同抑菌方式的比较第51-52页
   ·最佳Bialaphos筛选浓度的确定第52-53页
   ·再生植株有效移栽的探索第53-54页
 第二节 转基因愈伤组织与再生植株的检测第54-61页
   ·愈伤组织的GUS组织活性检测第54页
   ·T0代植株的PCR检测第54-56页
   ·T0代转基因小麦叶片的GUS组织活性检测第56-57页
   ·T1代转基因植株PCR检测第57-58页
   ·T1代转基因阳性植株的Southern Blot验证第58页
   ·T1代转基因植株除草剂抗性与耐盐性检测第58-61页
第四章 讨论第61-65页
   ·农杆菌介导的小麦愈伤组织遗传转化方法优化第61-63页
   ·转基因再生植株的移栽第63-64页
   ·小麦TaCHP基因转基因植株的获得第64-65页
参考文献第65-71页
致谢第71-72页
学位论文评阅及答辩情况表第72页

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