| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1. 引言 | 第10-18页 |
| ·文献综述 | 第10-15页 |
| ·纤维素酶研究概况 | 第10-13页 |
| ·酿酒酵母表面展示系统 | 第13-15页 |
| ·研究目的与意义 | 第15-16页 |
| ·研究路线 | 第16-18页 |
| 2. 材料与方法 | 第18-31页 |
| ·实验材料 | 第18-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·培养基及配制 | 第18-19页 |
| ·主要试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第20-21页 |
| ·引物合成 | 第21-22页 |
| ·纤维素降解菌的筛选 | 第22-24页 |
| ·菌种的富集培养 | 第22页 |
| ·菌种的初筛分离培养 | 第22页 |
| ·纤维素降解菌的复筛培养 | 第22页 |
| ·酶活测定方法及标准曲线制作 | 第22-24页 |
| ·纤维素降解菌形态学分析及分类地位的鉴定 | 第24-25页 |
| ·菌株形态观察 | 第24页 |
| ·菌株CD-6基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·菌株CD-6ITS序列扩增及回收 | 第24页 |
| ·DNA片段与pGEM-T easy载体连接、转化和测序 | 第24-25页 |
| ·纤维素降解菌酶活性检测 | 第25页 |
| ·三种纤维素酶基因的克隆 | 第25-27页 |
| ·总RNA提取方法 | 第25页 |
| ·cDNA合成 | 第25页 |
| ·长枝木霉外切葡聚糖酶基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·里氏木霉内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第26页 |
| ·黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·三种纤维素酶基因重组酵母表面展示载体的构建 | 第27-28页 |
| ·表面展示载体的构建 | 第27页 |
| ·外切葡聚糖酶表面展示载体的构建 | 第27-28页 |
| ·内切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶表面展示载体的构建 | 第28页 |
| ·表达纤维素酶基因重组酵母的构建及鉴定 | 第28-29页 |
| ·酿酒酵母重组菌株纤维素酶活性及功能检测 | 第29-31页 |
| ·重组表面展示酵母诱导表达 | 第30页 |
| ·重组酶酶学性质及功能检测 | 第30页 |
| ·重组酿酒酵母菌株利用微晶纤维素生产乙醇 | 第30-31页 |
| 3. 结果与分析 | 第31-45页 |
| ·纤维素降解菌的筛选、酶活性检测 | 第31-33页 |
| ·纤维素降解菌筛选 | 第31页 |
| ·酶活标准曲线制作 | 第31-33页 |
| ·纤维素降解菌的鉴定 | 第33-36页 |
| ·菌株CD-6形态观察、生理特性研究 | 第33-34页 |
| ·核糖体-DNA ITS序列的分析 | 第34页 |
| ·长枝木霉CD-6纤维素酶酶活性研究 | 第34-36页 |
| ·三种纤维素酶基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·长枝木霉外切葡聚糖酶基因cbhⅡ的克隆 | 第36-37页 |
| ·里氏木霉内切葡聚糖酶基因eglⅡ的克隆 | 第37页 |
| ·黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因bgl的克隆 | 第37页 |
| ·纤维素酶酿酒酵母表面展示载体的构建 | 第37-39页 |
| ·外切葡聚糖酶表面展示载体的构建 | 第37-38页 |
| ·内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶表面展示载体的构建 | 第38-39页 |
| ·表达纤维素酶基因重组酵母菌株的鉴定 | 第39-41页 |
| ·酿酒酵母菌株纤维素酶的活性及酶学性质分析 | 第41-45页 |
| ·重组菌株纤维素酶的酶活检测 | 第41-42页 |
| ·重组菌株CEN-pYED-CBH-EG-BGL纤维素酶的酶学性质分析 | 第42-43页 |
| ·重组酿酒酵母菌株直接利用微晶纤维素生产乙醇 | 第43-45页 |
| 4. 讨论 | 第45-48页 |
| ·长枝木霉CD-6的筛选及纤维素酶活性分析 | 第45页 |
| ·三种纤维素酶基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·表面展示不同纤维素酶的重组酿酒酵母活性研究 | 第46-48页 |
| 5. 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第57页 |