| 英文缩略词表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-16页 |
| 巨噬细胞金属弹力酶基因转染CT-26细胞对小鼠原位结肠癌生长及微血管生成的影响 | 第16-80页 |
| 1.前言 | 第16-18页 |
| 2.材料与方法 | 第18-47页 |
| ·实验材料 | 第18-23页 |
| ·实验试剂 | 第18-19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·质粒、菌株及细胞株 | 第19页 |
| ·部分试剂的配制 | 第19-22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-47页 |
| ·小鼠MME基因克隆 | 第23-28页 |
| ·PCR扩增MME cDNA片段 | 第23-25页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第25页 |
| ·纯化后的PCR产物克隆入pGEM-T载体 | 第25-26页 |
| ·感受态XL_1-blue菌的制备 | 第26页 |
| ·连接产物转化XL_1-blue感受态菌株 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆(pGEM-T-MME/XL_1-blue)的鉴定和重组质粒提取 | 第27页 |
| ·重组质粒pGEM-T-MME的鉴定 | 第27-28页 |
| ·构建MME基因真核表达载体 | 第28-33页 |
| ·目的片段和表达载体质粒的双酶切反应 | 第28-29页 |
| ·目的片段和表达载体的回收、纯化 | 第29页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第29-30页 |
| ·感受态DH5α菌的制备 | 第30页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态菌株 | 第30页 |
| ·阳性克隆(pcDNA3.1-MME/DH5α)的鉴定和重组质粒提取 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-MME的鉴定 | 第31-33页 |
| ·小鼠CT-26结肠癌细胞的培养 | 第33页 |
| ·MME真核表达载体稳定转染CT-26结肠癌细胞 | 第33-34页 |
| ·确定G418筛选浓度 | 第33页 |
| ·磷酸钙共沉淀法转染CT-26细胞 | 第33-34页 |
| ·目的基因在稳定转染CT-26细胞中表达的鉴定 | 第34-39页 |
| ·RT-PCR | 第34-37页 |
| ·免疫细胞化学染色(S-P)法 | 第37-38页 |
| ·western blot分析 | 第38-39页 |
| ·重组MME蛋白的酶活性鉴定 | 第39-41页 |
| ·体外分解Ⅰ型胶原蛋白试验 | 第39-40页 |
| ·明胶酶谱分析(Gelatin zymography) | 第40-41页 |
| ·BALB／C小鼠结肠癌原位种植模型的建立 | 第41-42页 |
| ·原位杂交(ISH) | 第42-44页 |
| ·MME原位杂交 | 第42-43页 |
| ·VEGF原位杂交 | 第43-44页 |
| ·免疫组织化学(IHC)染色 | 第44-45页 |
| ·CT-26细胞培养上清和原位结肠癌组织中VEGF表达的Western blot分析 | 第45-46页 |
| ·统计分析 | 第46-47页 |
| 3.结果 | 第47-67页 |
| ·小鼠MME基因克隆 | 第47-52页 |
| ·PCR产物电泳分析 | 第47页 |
| ·重组质粒PGEM-T-MME的鉴定 | 第47-52页 |
| ·双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·MME核苷酸序列测定 | 第48-52页 |
| ·pcDNA3.1(+)-MME真核表达载体的鉴定 | 第52-53页 |
| ·稳定转染CT-26小鼠结肠癌细胞株的筛选 | 第53-54页 |
| ·目的基因在稳定转染细胞株中表达的鉴定 | 第54-56页 |
| ·RT-PCR检测MME mRNA表达 | 第54-55页 |
| ·免疫细胞化学染色检测细胞内MME蛋白表达 | 第55-56页 |
| ·Western blot检测MME蛋白的表达 | 第56页 |
| ·重组MME蛋白的酶活性鉴定 | 第56-59页 |
| ·体外分解Ⅰ型胶原蛋白试验 | 第57-58页 |
| ·明胶酶谱分析 | 第58-59页 |
| ·小鼠原位结肠癌模型研究 | 第59-62页 |
| ·MME对荷瘤小鼠生存时间的影响 | 第59页 |
| ·MME对小鼠原位结肠癌生长和转移的影响 | 第59-62页 |
| ·MME对小鼠原位结肠癌组织中MVD的影响 | 第62-63页 |
| ·ISH检测原位结肠癌组织中MME mRNA的表达 | 第63-64页 |
| ·ISH检测原位结肠癌组织中VEGF mRNA的表达 | 第64-65页 |
| ·IHC检测原位结肠癌组织中MME蛋白表达 | 第65页 |
| ·IHC检测原位结肠癌组织中VEGF蛋白表达 | 第65-66页 |
| ·Western blot检测CT-26细胞培养上清和原位结肠癌组织中VEGF的表达 | 第66-67页 |
| 4.讨论 | 第67-72页 |
| ·MME基因真核表达载体的构建和鉴定 | 第67-68页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-MME在CT-26细胞中的表达 | 第68-69页 |
| ·动物模型研究 | 第69-72页 |
| 5.结论 | 第72-73页 |
| 6.目前存在的问题及下一步计划 | 第73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录 | 第80-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 综述 | 第84-101页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
