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猪传染性胃肠炎病毒S基因乳腺特异性真核表达载体构建的研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-12页
前言部分第12-33页
 第一章 猪传染性胃肠炎病毒的研究进展第12-20页
  1 猪传染性胃肠炎的概述第12页
  2 猪传染性胃肠炎病毒研究进展第12-20页
   ·TGEV 形态学特征第12-13页
   ·TGEV 的理化特性第13页
   ·TGEV 的生物学特性第13页
   ·TGEV 的病原性第13-14页
   ·TGEV 的抗原性第14-15页
   ·TGEV 基因组结构第15-18页
     ·TGEV S 糖蛋白第15-16页
     ·TGEV M 糖蛋白第16-17页
     ·TGEV N 糖蛋白第17页
     ·TGEV 非结构蛋白第17-18页
   ·TGEV 繁殖机制第18-20页
 第二章 DNA 疫苗研究进展第20-28页
  1 基因疫苗研究进程简介第20-22页
  2 DNA 疫苗的制备第22-23页
   ·抗原编码基因的筛选第22页
   ·质粒表达载体的构建第22-23页
  3 基因免疫机制及优点第23-25页
   ·基因免疫机制第23-24页
   ·基因免疫的优点第24-25页
  4 DNA 疫苗的安全性和存在问题第25-26页
  5 DNA 疫苗应用前景第26-28页
 第三章 猪传染性胃肠炎病毒 DNA 疫苗研究进展第28-33页
  1 猪传染性胃肠炎病毒转基因疫苗研究进展第28-31页
   ·可食用转基因植物疫苗第28-29页
   ·基因工程亚单位疫苗第29页
   ·合成肽疫苗第29-30页
   ·基因缺失疫苗第30页
   ·RNA 复制子疫苗第30-31页
   ·活载体重组病毒疫苗第31页
  2 猪传染性胃肠炎可食疫苗可行性及前景第31-33页
实验研究部分第33-56页
 第四章 猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白 S 基因克隆第33-48页
  1 材料和方法第33-41页
   ·组织来源第33页
   ·质粒和菌种第33-34页
   ·试剂和仪器第34-35页
   ·引物设计合成第35-36页
   ·TGEV 总 RNA 提取及检测第36-37页
     ·TGEV 总 RNA 提取第36页
     ·TGEV 总 RNA 完整性的检测第36-37页
   ·RT-PCR第37-39页
     ·反转录合成 cDNA第37页
     ·片段 S1 和 S2 的 PCR 扩增第37-38页
     ·PCR 产物的酶切鉴定第38-39页
   ·扩增产物的 T-A 克隆第39-40页
   ·重组质粒的酶切鉴定第40-41页
   ·目的片断序列测定第41页
   ·S 基因全长序列 PCR 扩增第41页
   ·S 基因克隆第41页
   ·重组质粒 pGEM-S 酶切和 PCR 鉴定第41页
  2 结果与分析第41-44页
   ·TGEV 总 RNA 完整性的检测第41-42页
   ·TGEV S 基因分段扩增第42页
   ·S1 和 S2 PCR 产物的酶切结果第42页
   ·重组质粒 pMD- S1 和 pMD- S2 的酶切鉴定第42-43页
   ·S 基因核酸序列分段测定及分析第43页
   ·S 基因全长序列 PCR 扩增及重组子鉴定第43-44页
  3 讨论第44-47页
   ·总 RNA 的完整性及 cDNA 的克隆第44页
   ·S 基因克隆策略与经验第44-45页
   ·S 基因 RT-PCR 引物设计第45-47页
  4 小结第47-48页
 第五章 猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白 S 基因乳腺特异性表达载体的构建第48-56页
  1 材料和方法第48-50页
   ·质粒和菌种第48-49页
   ·工具酶和试剂第49页
   ·仪器第49页
   ·引物设计合成第49页
   ·S 基因的 PCR 扩增第49页
   ·S′基因克隆及重组子酶切鉴定第49页
   ·真核表达载体构建第49-50页
     ·质粒 pGEM-S′和 pG-BBCP 酶切鉴定第49-50页
     ·重组质粒的克隆 pG-BBCPS′及鉴定第50页
     ·真核表达载体 pEGFP-BCPS′构建及鉴定第50页
  2 结果与分析第50-52页
   ·S′基因的 PCR 产物电泳第50页
   ·重组子 pGEM-S′酶切鉴定第50-51页
   ·质粒 pGEM-S′和 pG-BBCP 酶切鉴定第51页
   ·重组质粒 pG-BBCPS′的克隆及鉴定第51-52页
   ·真核表达载体 pEGFP-BCPS′构建及鉴定第52页
  3 讨论第52-54页
  4 小结第54-56页
结论第56-57页
参考文献第57-65页
附录第65-75页
致谢第75-76页
个人简介第76页

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