| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·灰霉病的发生状况 | 第10页 |
| ·丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第10-12页 |
| ·根癌农杆菌介导真菌遗传转化的机理 | 第12-13页 |
| ·根癌农杆菌介导丝状真菌转化的特点 | 第13-14页 |
| ·T-DNA 侧翼序列的扩增和分析 | 第14-15页 |
| ·本研究的内容及意义 | 第15-16页 |
| 2 材料 | 第16-18页 |
| ·供试菌株 | 第16页 |
| ·主要供试试剂及缓冲液 | 第16-17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| 3 方法 | 第18-28页 |
| ·菌株的复壮 | 第18页 |
| ·ATMT 转化条件的摸索 | 第18-19页 |
| ·潮霉素对灰葡萄孢分生孢子萌发和菌落生长的影响 | 第18页 |
| ·头孢噻肟钠、羧卞青霉素对农杆菌生长的影响 | 第18页 |
| ·不同共培养方式及培养时间对转化效率的影响 | 第18页 |
| ·转化与筛选 | 第18-19页 |
| ·转化子稳定性检测 | 第19页 |
| ·T-DNA 插入的分子检测 | 第19-23页 |
| ·转化子基因组DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第20页 |
| ·转化子PCR 验证 | 第20-21页 |
| ·Southern blot 分析 | 第21-23页 |
| ·突变体插入位点侧翼序列的克隆和测序 | 第23-27页 |
| ·热不对称嵌套PCR（TAIL-PCR）检测 | 第23-25页 |
| ·TAIL-PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第25页 |
| ·PCR 产物与pMD19-T 载体的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第26页 |
| ·PCR 验证阳性克隆 | 第26页 |
| ·质粒提取（碱裂解法） | 第26-27页 |
| ·测序分析 | 第27页 |
| ·突变体生物学性状分析 | 第27-28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-44页 |
| ·潮霉素B 对灰葡萄孢分生孢子萌发和菌落生长的影响 | 第28页 |
| ·头孢噻肟钠、羧卞青霉素对农杆菌生长抑制的测定 | 第28-29页 |
| ·不同共培养方式及分生孢子活力对转化效率的影响 | 第29页 |
| ·转化子稳定性检测 | 第29页 |
| ·T-DNA 插入突变株的PCR 鉴定及Southern blot 分析 | 第29-30页 |
| ·T-DNA 插入侧翼序列的扩增 | 第30-31页 |
| ·灰葡萄孢突变株的TAIL-PCR 结果 | 第30-31页 |
| ·插入片段的PCR 检测 | 第31页 |
| ·灰葡萄孢基因组T-DNA 侧翼序列分析 | 第31-41页 |
| ·突变体的生物性状 | 第41-44页 |
| ·菌落形态 | 第41-42页 |
| ·分生孢子形态和产孢量 | 第42-43页 |
| ·突变体的致病性变化 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| ·关于根癌农杆菌介导灰葡萄孢的遗传转化 | 第44页 |
| ·关于T-DNA 插入位点的侧翼序列获得及分析 | 第44-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录 | 第52-64页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |