| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| ·IBDV 的结构和分子生物学 | 第17-19页 |
| ·IBDV 的形态和血清型 | 第18页 |
| ·IBDV 的基因组和编码蛋白 | 第18-19页 |
| ·IBD 的流行特点 | 第19页 |
| ·IBD 的防制 | 第19-21页 |
| ·IBD 的防控措施 | 第19-20页 |
| ·IBD 疫苗研究进展 | 第20-21页 |
| ·反向遗传技术在新型疫苗研究中的应用 | 第21-23页 |
| ·问题与展望 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 亲本毒株筛选及其全基因组的克隆与序列分析 | 第25-34页 |
| 摘要 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-29页 |
| ·病毒、鸡胚及试验动物 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·引物设计与合成 | 第26页 |
| ·病料处理 | 第26页 |
| ·病毒复状 | 第26-27页 |
| ·毒价的测定 | 第27页 |
| ·SPF 鸡致死率的测定 | 第27页 |
| ·IBDV VP2 抗原性预测分析 | 第27页 |
| ·IBDV 全基因组RNA 的提取 | 第27页 |
| ·IBDV 全基因组 RNA 的反转录 | 第27-28页 |
| ·IBDV 全基因组克隆 | 第28页 |
| ·IBDV 全基因组遗传演化分析 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-32页 |
| ·ELD_(50)测定及致死率测定结果 | 第29页 |
| ·VP2 序列及抗原性分析 | 第29页 |
| ·全基因组扩增及测序 | 第29-30页 |
| ·全基因组遗传演化分析 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·亲本毒株的筛选 | 第32-33页 |
| ·HLJ0504 毒株是一株有代表性的自然重组病毒 | 第33-34页 |
| 第三章 IBDV 新型疫苗株构建模式的筛选 | 第34-49页 |
| 摘要 | 第34页 |
| ·材料和方法 | 第34-39页 |
| ·质粒、细胞和单克隆抗体 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·引物设计与合成 | 第36页 |
| ·核酶结构的引入 | 第36页 |
| ·双点突变及VP5 缺失突变 | 第36页 |
| ·全基因组克隆的构建 | 第36-37页 |
| ·病毒拯救 | 第37页 |
| ·拯救病毒IFA 检测 | 第37-38页 |
| ·拯救病毒电镜观察 | 第38页 |
| ·拯救病毒RT-PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·拯救病毒体外复制动力学研究 | 第38页 |
| ·拯救病毒毒力试验 | 第38页 |
| ·试验鸡法氏囊RT-PCR 与序列测定 | 第38-39页 |
| ·试验鸡血清抗体的检测 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-47页 |
| ·感染性分子克隆的构建 | 第39-40页 |
| ·拯救病毒细胞病变 | 第40页 |
| ·拯救病毒IFA 检测 | 第40-41页 |
| ·电镜观察 | 第41页 |
| ·拯救病毒的 RT-PCR 检测 | 第41页 |
| ·拯救病毒体外复制动力学研究 | 第41-42页 |
| ·试验鸡症状及剖检变化 | 第42-43页 |
| ·试验鸡的囊重比与囊指数 | 第43-44页 |
| ·试验鸡法氏囊的组织病理变化 | 第44页 |
| ·试验鸡法氏囊的 RT-PCR 与序列测定 | 第44-45页 |
| ·试验鸡血清抗体的检测 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·HLJ0504 细胞嗜性的改变 | 第47页 |
| ·VP5 是毒力因子 | 第47-48页 |
| ·候选疫苗株应具备的特性 | 第48-49页 |
| 第四章 新型疫苗株的构建及其生物学性状测定 | 第49-62页 |
| 摘要 | 第49页 |
| ·材料和方法 | 第49-54页 |
| ·病毒 | 第49页 |
| ·质粒 | 第49-50页 |
| ·细胞和单克隆抗体 | 第50页 |
| ·实验动物 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·引物设计与合成 | 第50页 |
| ·HLJ0504 株 VP2 基因替换 Gt 株基因组 VP2 | 第50-52页 |
| ·感染性分子克隆的构建 | 第52页 |
| ·病毒拯救 | 第52页 |
| ·拯救病毒IFA 检测 | 第52页 |
| ·拯救病毒电镜观察 | 第52页 |
| ·拯救病毒 RT-PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·拯救病毒在CEF 细胞上的复制特性 | 第52-53页 |
| ·动物实验 | 第53页 |
| ·攻毒保护试验 | 第53-54页 |
| ·拯救病毒遗传稳定性试验 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-60页 |
| ·VP2 修饰、替换与感染性分子克隆构建 | 第54-55页 |
| ·病毒拯救 | 第55页 |
| ·拯救病毒IFA 检测 | 第55页 |
| ·拯救病毒电镜观察 | 第55-56页 |
| ·拯救病毒RT-PCR 鉴定 | 第56页 |
| ·拯救病毒复制特性研究 | 第56-57页 |
| ·拯救病毒的致病性 | 第57-58页 |
| ·拯救病毒的免疫效果评价 | 第58-59页 |
| ·拯救病毒的遗传稳定性 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·重组病毒rGtHLJVP2 复制特性良好 | 第60页 |
| ·重组病毒rGtHLJVP2 对SPF 鸡无致病性 | 第60页 |
| ·重组病毒rGtHLJVP2 遗传稳定性良好 | 第60-61页 |
| ·重组病毒rGtHLJVP2 免疫原性良好 | 第61-62页 |
| 第五章 新型疫苗株免疫效果的评价 | 第62-71页 |
| 摘要 | 第62页 |
| ·材料和方法 | 第62-64页 |
| ·病毒 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·试验分组与免疫 | 第62-63页 |
| ·血清抗体检测 | 第63页 |
| ·CD4+、CD8+淋巴细胞分离及检测 | 第63页 |
| ·疫苗株交叉保护性试验 | 第63页 |
| ·疫苗株致病力评估 | 第63页 |
| ·疫苗株在法氏囊中的载量检测 | 第63-64页 |
| ·试验鸡法氏囊RT-PCR与序列测定 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-69页 |
| ·疫苗株免疫效果评价 | 第64-65页 |
| ·疫苗株免疫保护效果 | 第65-66页 |
| ·疫苗株的致病力比较 | 第66-68页 |
| ·试验鸡法氏囊病毒载量的检测 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·疫苗株体液免疫比较 | 第69页 |
| ·疫苗株 CD4+、CD8+T 淋巴细胞检测 | 第69-70页 |
| ·疫苗株免疫保护效果 | 第70页 |
| ·疫苗株的致病性研究 | 第70-71页 |
| 第六章 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
