| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-30页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第12-20页 |
| ·丝状真菌的遗传转化方法 | 第12-16页 |
| ·筛选标记 | 第16-18页 |
| ·表达载体 | 第18-20页 |
| ·真菌酸性蛋白酶 | 第20-28页 |
| ·酸性蛋白酶的酶学性质 | 第21-22页 |
| ·酸性蛋白酶的应用 | 第22-24页 |
| ·真菌类酸性蛋白酶的研究进展 | 第24-28页 |
| ·本课题来源、本课题研究内容、意义 | 第28-30页 |
| ·来源 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28页 |
| ·意义 | 第28-30页 |
| 第二章 曲霉宿主菌筛选标记研究 | 第30-36页 |
| ·引言 | 第30-31页 |
| ·材料与方法 | 第31-32页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-34页 |
| ·米曲霉宿主原生质体PEG-CaCl_2筛选标记研究 | 第32-33页 |
| ·米曲霉农杆菌介导转化宿主筛选标记研究 | 第33-34页 |
| ·泡盛曲霉农杆菌介导转化宿主菌筛选标记研究 | 第34页 |
| ·本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 表达载体构建 | 第36-46页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·技术路线 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·主要培养基 | 第38页 |
| ·主要菌种及质粒 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·质粒的提取 | 第39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·质粒的胶回收纯化 | 第40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·表达载体pHGW-aPA 转化农杆菌 | 第41-42页 |
| ·已转化农杆菌中表达载体的验证 | 第42-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-45页 |
| ·各入门载体和目的载体质粒的提取 | 第43-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·农杆菌的转化 | 第45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 曲霉类丝状真菌转化方法的探索 | 第46-61页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·技术路线 | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·主要培养基 | 第48-49页 |
| ·主要菌种和质粒 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-53页 |
| ·米曲霉原生质体PEG-CaCl_2转化 | 第50-51页 |
| ·农杆菌介导的曲霉转化 | 第51-52页 |
| ·转化子的PCR 及酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-59页 |
| ·米曲霉AS3.951 原生质体转化 | 第53-55页 |
| ·农杆菌介导转化曲霉 | 第55-59页 |
| ·本章小结 | 第59-61页 |
| 第五章 酸性蛋白酶基因在曲霉中的初步表达 | 第61-73页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·主要试剂 | 第61-63页 |
| ·主要培养基 | 第63页 |
| ·实验仪器 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-69页 |
| ·转化子表观酶活 | 第63-64页 |
| ·转化子SDS-PAGE 检测 | 第64-65页 |
| ·泡盛曲霉转化子RT-PCR 检测 | 第65-67页 |
| ·泡盛曲霉转化子Western blot 检测 | 第67-68页 |
| ·泡盛曲霉转化子酶活检测 | 第68-69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-72页 |
| ·米曲霉AS3.951 转化子重组酸性蛋白酶的表达 | 第69-70页 |
| ·泡盛曲霉CBS115.52 转化子重组酸性蛋白酶转录水平检测 | 第70页 |
| ·泡盛曲霉转化子目的蛋白Western blot 检测 | 第70-71页 |
| ·泡盛曲霉转化子酶活力 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 结论与展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
