| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·乳链菌肽(Nisin) | 第11-16页 |
| ·Nisin分子结构 | 第12页 |
| ·Nisin的杀菌机制 | 第12-13页 |
| ·Nisin合成有关的基因 | 第13-16页 |
| ·编码Nisin抗性的基因nisI | 第16-17页 |
| ·其他食品选择标记在乳酸菌中的应用 | 第17-20页 |
| ·显性选择标记 | 第17-18页 |
| ·互补选择标记 | 第18-19页 |
| ·两组分食品级选择标记 | 第19-20页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白 | 第20页 |
| ·本课题的研究背景、意义及研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 Nisin抗性基因nisI在T载体中的克隆 | 第22-33页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第22页 |
| ·主要生化试剂 | 第22页 |
| ·引物设计与合成 | 第22-23页 |
| ·主要设备 | 第23-24页 |
| ·培养基、抗生素以及常用溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·主要方法 | 第25-29页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·质粒pLEB590的提取 | 第26页 |
| ·琼脂糖电泳鉴定DNA | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·Nisin抗性基因nisI的扩增 | 第27页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第27-28页 |
| ·Nisin抗性基因nisI的TA克隆 | 第28页 |
| ·转化子的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的测序 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·Nisin抗性基因nisI的扩增 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·Nisin抗性基因nisI的扩增 | 第31页 |
| ·Nisin抗性基因nisI在T载体中的克隆 | 第31-32页 |
| ·采用碱裂解法从乳酸乳球菌中提取质粒 | 第32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 Nisin抗性基因nisI在MG1363中的表达 | 第33-43页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·质粒与实验菌株 | 第33页 |
| ·主要生化试剂 | 第33页 |
| ·实验设备 | 第33-34页 |
| ·培养基,抗生素以及常用溶液的配制 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·从E.coli XL-Blue中提取质粒 | 第35页 |
| ·从L.lactis MG1363中提取质粒 | 第35页 |
| ·MG1363感受态的制备 | 第35页 |
| ·电转化 | 第35页 |
| ·超微量紫外分光光度法定量DNA | 第35-36页 |
| ·限制性酶切 | 第36页 |
| ·回收酶切后的目的片段 | 第36-37页 |
| ·构建重组表达载体 | 第37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·重组菌MG1363/pMG36e-NisI对Nisin的耐受性试验 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·质粒pMG36e及质粒pMD19-NisI的提取及酶切 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pMG36e-NisI的构建 | 第38-39页 |
| ·Nisin抗性基因nisI在MG1363中的表达 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 食品级表达载体pMG36N的构建 | 第43-57页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要生化试剂 | 第43-44页 |
| ·实验设备 | 第44页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·pMG36e-NisI在MG1363中的遗传稳定性研究 | 第44-45页 |
| ·Nisin抗性基因nisI与红霉素抗性基因Em~r对MG1363生长的影响 | 第45页 |
| ·红霉素基因的敲除,亦即pMG36N的构建 | 第45-46页 |
| ·EGFP在MG1363中表达的初步研究 | 第46-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-55页 |
| ·pMG36e-NisI在MG1363中的遗传稳定性研究 | 第49页 |
| ·Nisin抗性基因nisI与红霉素抗性基因Emr对MG1363生长的影响 | 第49-50页 |
| ·pMG36N的构建 | 第50页 |
| ·EGFP在L.lactis MG1363中表达的初步研究 | 第50-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 结论与展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录-相关测序图谱 | 第62-65页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附件 | 第67页 |
